本文關(guān)鍵詞：miR-181a對犢牛原代肝細(xì)胞糖脂代謝穩(wěn)態(tài)的調(diào)控機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：過渡期奶牛由于干物質(zhì)攝入量(Dry matter intake,DMI)減少而能量需求增加常處于能量負(fù)平衡(Negative energy balance,NEB)狀態(tài),NEB會引起脂肪組織脂肪動員,因此血液中非酯化脂肪酸(Nonestesterified fatty acids,NEFAs)的濃度會顯著升高。當(dāng)大量的NEFAs在肝臟長時間過量蓄積會引起肝細(xì)胞細(xì)胞器受損、細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)障礙,進(jìn)而導(dǎo)致肝臟內(nèi)糖脂代謝失衡�，F(xiàn)已知mi RNAs通過轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制參與肝細(xì)胞內(nèi)葡萄糖的攝取利用及脂類的合成分解等代謝過程。然而對于奶牛相關(guān)mi RNAs功能和靶標(biāo)的研究卻鮮有報(bào)道,因此本實(shí)驗(yàn)通過體外培養(yǎng)犢牛原代肝細(xì)胞,探究mi R-181a及其靶標(biāo)對肝細(xì)胞糖脂代謝穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)機(jī)制,為奶牛營養(yǎng)代謝病的防治提供理論基礎(chǔ)。通過對臨床酮病奶牛血液和肝臟中mi R-181a的檢測發(fā)現(xiàn),mi R-181a在酮病奶牛血液和肝臟中的含量顯著高于正常奶牛。體外分離培養(yǎng)犢牛原代肝細(xì)胞,利用不同濃度的NEFAs(0,0.6,1.2,2.4 mmol/L)處理肝細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)當(dāng)NEFAs濃度高于1.2 mmol/L時,肝細(xì)胞的胰島素敏感性降低,脂沉積增加,同時mi R-181a的表達(dá)量也顯著升高。說明mi R-181a表達(dá)量的高低可能與肝細(xì)胞的糖脂代謝穩(wěn)態(tài)有關(guān)。利用mi R-181a的模擬體(mimics)將mi R-181a在犢牛原代肝細(xì)胞內(nèi)過表達(dá),結(jié)果顯示過表達(dá)組肝細(xì)胞的胰島素敏感性降低,胰島素刺激的肝細(xì)胞葡萄糖攝取減少,糖異生基因G-6-P和PEPCK表達(dá)增加,表現(xiàn)為胰島素抵抗,同時控制脂合成的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子SREBP-1c表達(dá)增加而控制脂分解的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子PPARα表達(dá)降低,表現(xiàn)為脂沉積增加。當(dāng)利用mi R-181a的抑制劑(inhibitors)抑制內(nèi)源性mi R-181a表達(dá)時,結(jié)果顯示抑制劑組的肝細(xì)胞胰島素敏感性增加,胰島素刺激的葡萄糖攝取增加,同時SREBP-1c表達(dá)減少而PPARα表達(dá)增加。而且當(dāng)肝細(xì)胞用高濃度NEFAs處理的同時利用mi R-181a inhibitors抑制內(nèi)源性mi R-181a的表達(dá),結(jié)果顯示,NEFAs和inhibitors共同處理組相比于NEFAs單獨(dú)處理組肝細(xì)胞的胰島素敏感性升高,細(xì)胞內(nèi)糖原含量升高,胰島素刺激的葡萄糖攝取能力增加,糖異生關(guān)鍵基因G-6-P和PEPCK表達(dá)降低,同時SREBP-1c表達(dá)減少而PPARα表達(dá)增加,細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量降低。上述結(jié)果表明過表達(dá)mi R-181a可以損傷肝細(xì)胞的糖脂代謝穩(wěn)態(tài),而抑制內(nèi)源性mi R-181a的表達(dá)可以改善高濃度NEFAs造成的糖脂代謝紊亂。通過mi RNA靶標(biāo)預(yù)測軟件Target Scan預(yù)測SIRT1是mi R-181a的靶基因。利用mi R-181a mimics和inhibitors將mi R-181a在犢牛原代肝細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)和抑制,通過Western blot和熒光定量PCR技術(shù)檢測SIRT1的表達(dá),發(fā)現(xiàn)過表達(dá)mi R-181a可以降低SIRT1蛋白和基因的表達(dá)量,而抑制mi R-181a表達(dá)可以增加SIRT1蛋白和基因的表達(dá)量,這些結(jié)果說明SIRT1的確是mi R-181a的靶標(biāo)。而且當(dāng)用SIRT1的抑制劑EX527處理肝細(xì)胞時,肝細(xì)胞也表現(xiàn)為胰島素抵抗和脂沉積增加,這與過表達(dá)mi R-181a的效果一致,另外利用SIRT1的激活劑白藜蘆醇(Resveratrol,Res)處理肝細(xì)胞并同時用高濃度NEFAs刺激,結(jié)果顯示Res和NEFAs同時添加組的胰島素敏感性和胰島素刺激的葡萄糖攝取能力等均高于NEFAs單獨(dú)處理組,而且同時添加組的脂沉積顯著降低,這表明Res可以改善高濃度NEFAs造成的糖脂代謝紊亂,而這一結(jié)果也和抑制mi R-181a的效果一致。綜上所述,過表達(dá)mi R-181a會引起奶牛肝細(xì)胞糖脂代謝紊亂,而抑制mi R-181a的表達(dá)有利于維持肝細(xì)胞糖脂代謝穩(wěn)態(tài),而且mi R-181a通過其靶基因SIRT1發(fā)揮調(diào)節(jié)奶牛肝細(xì)胞糖脂代謝的作用。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞 miR-181a SIRT1 白藜蘆醇 糖脂代謝
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S823
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 英文縮寫詞表12-13
• 前言13-15
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述15-37
• 第一章 過渡期奶牛的糖脂代謝紊亂15-25
• 1.1 過渡期奶牛生理特征15-17
• 1.2 奶牛的胰島素抵抗17-20
• 1.3 酮病和脂肪肝20-22
• 1.4 SIRT1和糖脂代謝22-24
• 1.5 小結(jié)24-25
• 第二章 miRNA簡介以及在畜禽方面的應(yīng)用25-37
• 2.1 miRNA簡介25-28
• 2.2 miRNA與胰島素敏感組織28-30
• 2.3 miRNA和非酒精性脂肪肝30-32
• 2.4 miRNA在畜禽方面的研究進(jìn)展32-36
• 2.5 小結(jié)36-37
• 第二篇 研究內(nèi)容37-75
• 第一章 酮病奶牛糖脂代謝狀態(tài)及miR-181a表達(dá)變化37-52
• 1.1 材料37-40
• 1.2 方法40-46
• 1.3 結(jié)果46-49
• 1.4 討論49-51
• 1.5 小結(jié)51-52
• 第二章 miR-181a對犢牛原代肝細(xì)胞糖脂代謝的調(diào)節(jié)作用52-66
• 2.1 材料52-53
• 2.2 方法53-56
• 2.3 結(jié)果56-64
• 2.4 討論64-65
• 2.5 小結(jié)65-66
• 第三章 miR-181a的靶基因SIRT1對犢牛原代肝細(xì)胞糖脂代謝的調(diào)節(jié)作用66-75
• 3.1 材料67
• 3.2 方法67
• 3.3 結(jié)果67-72
• 3.4 討論72-74
• 3.5 小結(jié)74-75
• 結(jié)論75-76
• 參考文獻(xiàn)76-90
• 導(dǎo)師簡介90-91
• 作者簡介91-92
• 在學(xué)期間所取得的科研成果92-93
• 致謝93

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 Xiao-Chen Wang;Xiao-Rong Zhan;Xin-Yu Li;Jun-Jie Yu;Xiao-Min Liu;;Micro RNA-185 regulates expression of lipid metabolism genes and improves insulin sensitivity in mice with non-alcoholic fatty liver disease[J];World Journal of Gastroenterology;2014年47期

2 George Liu;M Scott Updike;;miRNA-dysregulation associated with tenderness variation induced by acute stress in Angus cattle[J];Journal of Animal Science and Biotechnology;2012年02期

  本文關(guān)鍵詞：miR-181a對犢牛原代肝細(xì)胞糖脂代謝穩(wěn)態(tài)的調(diào)控機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：308734