體外胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cells,ESCs）向生殖細(xì)胞分化可用于治療不育癥,同時(shí)也為揭示種系世代的分子機(jī)制提供最佳模型。試驗(yàn)旨在探討視黃酸（retinoic acid,RA）誘導(dǎo)雞胚胎干細(xì)胞（chicken embryonic stem cells,cESCs）向雄性生殖細(xì)胞（male germ cells,MGCs）分化的作用效果。利用胰蛋白酶消化法從新鮮種蛋X期雞胚中分離胚胎干細(xì)胞,以雞胚成纖維（chicken embryo fibroblast,CEF）細(xì)胞為滋養(yǎng)層,進(jìn)行體外培養(yǎng),利用形態(tài)法、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）染色和胚胎階段特異性表面抗原（embryo specific surface antigen 1,SSEA-1）檢測對(duì)獲得的胚胎干細(xì)胞進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明,獲得典型的呈巢狀或島狀的cESCs克隆,細(xì)胞AKP染色呈藍(lán)紫色,表明其具有較高的內(nèi)源性AKP活性;SSEA-1鑒定結(jié)果呈陽性,顯示cESCs克隆具有多能性。采用10^-5 mol/L RA誘導(dǎo)雞胚胎干細(xì)胞向雄性生殖細(xì)胞分化,鏡下觀察細(xì)胞... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(07)北大核心

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【部分圖文】：

雞胚胎干細(xì)胞克隆(400×)

利用CHD-W基因?qū)ESCs進(jìn)行性別鑒定,以排除cESCs本身核型干擾。cESCs性別鑒定結(jié)果顯示,雄性(ZZ)在600 bp處有一條帶,雌性(ZW)在450和600 bp處有兩條帶(圖2)。2.2.2 AKP染色和SSEA-1鑒定

cESCs在添加10-5 mol/L RA的誘導(dǎo)培養(yǎng)基作用下向雄性生殖細(xì)胞分化,細(xì)胞形態(tài)變化見圖3。由圖3可知,誘導(dǎo)2～4 d出現(xiàn)類胚體樣細(xì)胞,6～8 d類配體樣細(xì)胞逐漸增大,10 d后部分類配體開始散開,變?yōu)樾〉膱A形細(xì)胞,14 d生殖樣細(xì)胞數(shù)目增多,呈聚團(tuán)生長。2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測結(jié)果


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