為獲得具有生物活性的偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）gE/gI蛋白,建立PRV抗體快速檢測(cè)方法。將含有PRV gE、gI基因的質(zhì)粒pFastBacdual-GP67-gE/gI轉(zhuǎn)化至宿主菌,經(jīng)位點(diǎn)特異性重組和藍(lán)白斑篩選后獲得重組桿粒rBacmid-gE/gI,轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞,獲得重組桿狀病毒。采用懸浮的Sf9細(xì)胞進(jìn)行發(fā)酵并純化產(chǎn)物,SDS-PAGE和Western blot分析鎳柱純化后的重組蛋白。結(jié)果顯示,重組桿粒在4 800 bp處克隆出預(yù)期大小的條帶,表示重組桿粒構(gòu)建成功。SDS-PAGE和Western blot表明,在50 ku和65 ku處出現(xiàn)預(yù)期大小的條帶,能與PRV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清特異性反應(yīng),不與PRV gE/gI缺失疫苗免疫血清反應(yīng)。結(jié)果表明gE/gI重組蛋白具有良好的反應(yīng)原性,為PRV抗體快速檢測(cè)及區(qū)分PRV野毒感染和疫苗免疫奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,41(03)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

rBacmid-gE/gI的PCR鑒定結(jié)果

gE/gI重組蛋白的Western blot鑒定結(jié)果

將經(jīng)Ni柱純化過(guò)的產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE電泳鑒定結(jié)果顯示,在50 ku和65 ku處得到2條單一的條帶與預(yù)期大小相符(圖3),表明PRV gE/gI基因在昆蟲細(xì)胞上成功表達(dá)且純化后蛋白純度高達(dá)90%。利用SDS-PAGE和Western blot技術(shù),變性處理后的純化產(chǎn)物與PRV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清反應(yīng),結(jié)果顯示純化后的gE/gI重組蛋白能與PRV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清反應(yīng)(圖4),表明純化后的gE/gI蛋白具有良好的反應(yīng)原性。圖4 gE/gI重組純化蛋白與PRV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清雜交結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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