新型鴨呼腸孤病毒（Novel duck reovirus,NDRV）病是一種以脾臟腫大、出血、壞死為主要特征的疾病,自2017年以來,發(fā)病率和死亡率相對(duì)較高,給我國(guó)養(yǎng)鴨業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究從臨床疑似樣品中分離到NDRV,對(duì)分離株進(jìn)行分離鑒定,構(gòu)建病毒感染模型,制備油乳劑滅活疫苗,為NDRV的防控提供技術(shù)支持。本實(shí)驗(yàn)室在2017年²019年對(duì)來自山東、安徽等地送檢的30份疑似患病樣品進(jìn)行RT-PCR檢測(cè),結(jié)果顯示10份樣品為陽性。對(duì)這10份陽性樣品進(jìn)行病毒分離,接種SPF雞胚胚體明顯出血,接種雞胚肝細(xì)胞產(chǎn)生合胞體病變。分離株測(cè)序后對(duì)其進(jìn)行同源性比對(duì)分析并繪制遺傳進(jìn)化樹,同源性比對(duì)結(jié)果顯示:10株分離株的同源性在97.4%⁹9.4%之間,分離株與DRV經(jīng)典毒株的同源性在94.6%⁹6.5%之間,說明NDRV較DRV發(fā)生明顯的變異。遺傳進(jìn)化樹結(jié)果顯示:分離株與水禽源呼腸孤病毒位于同一分支,說明NDRV與水禽源呼腸孤病毒的遺傳關(guān)系相對(duì)較近。通過對(duì)分離株進(jìn)行同源性比對(duì)及遺傳進(jìn)化樹分析,SDYC株與DRV的同源性差異最大,... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

病毒感染SPF雞胚的病變圖

新型鴨呼腸孤病毒的分離鑒定及油乳劑滅活疫苗的制備243結(jié)果與分析3.1病毒的分離鑒定結(jié)果3.1.1病毒的分離與傳代病毒分離液接種SPF雞胚后，自第三代開始，雞胚的死亡時(shí)間以及剖檢病變癥狀趨于穩(wěn)定，雞胚的死亡時(shí)間集中在48h~72h，死亡雞胚的胚體發(fā)育不良，胚體全身嚴(yán)重充血、出血癥狀，主要呈現(xiàn)彌漫性針尖狀的出血點(diǎn)。圖1病毒感染SPF雞胚的病變圖Figure1CytopathiceffectofSPFchickenembryoinfectedbyNDRVA:雞胚胚體出血B:雞胚胚體正常A：EmbryobodybleedingofchickenB：Embryobodyisnormalofchicken病毒分離液接種生長(zhǎng)狀態(tài)良好的雞胚肝細(xì)胞，從第三代開始出現(xiàn)以細(xì)胞出現(xiàn)球狀融合為特征的合胞體細(xì)胞病變。傳至第六代后，細(xì)胞出現(xiàn)病變的時(shí)間以及病變程度趨于穩(wěn)定，具體表現(xiàn)為：接種病毒后48h有80%細(xì)胞產(chǎn)生典型病變特征。圖2病毒感染雞胚肝細(xì)胞病變圖Figure2CytopathiceffectofchickenlivercancercellsinfectedbytheNDRVA：病毒分離株對(duì)雞胚肝細(xì)胞的感染病變B：正常的雞胚肝細(xì)胞A:CytopathiceffectofchickenembryohepatocytesbyNDRVB:Normalchickenembryohepatocytes

新型鴨呼腸孤病毒的分離鑒定及油乳劑滅活疫苗的制備26性在35.9%~36.3%之間，同源關(guān)系在禽呼腸孤病毒中最遠(yuǎn)。通過繪制遺傳進(jìn)化樹，分析可得：分離株與DRV、GRV在同一分支上，說明新型鴨呼腸孤病毒與水禽源鴨呼腸孤病毒的遺傳關(guān)系相對(duì)較近；分離株與ARV在不同的分支上，說明NDRV與ARV的遺傳關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)；分離株與MDRV在兩個(gè)不同的大的分支上，說明NDRV與MDRV的遺傳關(guān)系在禽呼腸孤病毒中最遠(yuǎn)。圖4SDYC株與ARV標(biāo)準(zhǔn)株同源性分析Figure4HomologyanalysisofSDYCstrainandARVclassicalstrain圖5SDYC株與ARV標(biāo)準(zhǔn)株遺傳進(jìn)化樹Figure5GeneticevolutiontreeofSDYCstrainandARVclassicalstrain3.1.5病毒的純凈性檢測(cè)提取穩(wěn)定分離出的細(xì)胞病毒液，提取RNA或DNA，進(jìn)行PCR或RT-PCR擴(kuò)增，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]兩株北京鴨源呼腸孤病毒生物學(xué)特性比較[D]. 鄭獻(xiàn)進(jìn).中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016

碩士論文
[1]禽腺病毒血清4型的分離鑒定及環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)診斷方法的建立[D]. 白元斌.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[2]禽呼腸孤病毒流行株的進(jìn)化及致病性研究[D]. 鐘麗.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017
[3]一株鵝呼腸孤病毒的分離鑒定及全基因組序列分析[D]. 劉水芳.揚(yáng)州大學(xué) 2015
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[5]表達(dá)禽（番鴨）呼腸孤病毒σC、σB蛋白基因DNA疫苗的構(gòu)建及免疫效力監(jiān)測(cè)[D]. 蔣慷慨.福建農(nóng)林大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3063813