鴨生長遲緩疫病是近年來我國新出現(xiàn)的傳染性疾病,以發(fā)病鴨精神萎靡、生長發(fā)育遲緩為主要特征。該病主要發(fā)生在櫻桃谷肉鴨,發(fā)病日齡集中在10²5日齡,少數(shù)鴨群于5¹4日齡也有發(fā)病。該病一年四季均可發(fā)生,整體的發(fā)病率在15%以下。早期從發(fā)病鴨體內(nèi)分離到一株未知RNA病毒,病毒粒子直徑在70¹00nm之間,有囊膜,命名為鴨生長遲緩病毒（Anhui2株）。該病毒人工感染不致死鴨子,但可在鴨群之間進(jìn)行水平傳播,引起鴨子生長緩慢,殘次率增高。本研究以鴨生長遲緩病毒Anhui2毒株作為免疫抗原,分3次免疫6周齡的BALB/c小鼠,小鼠血清的抗體效價可以達(dá)到1:10000以上,將效價最高小鼠加強(qiáng)免疫后,取其脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞進(jìn)行融合,獲得抗Anhui2毒株的雜交瘤細(xì)胞。經(jīng)過間接ELISA的篩選和3次連續(xù)的亞克隆,得到2株能穩(wěn)定分泌抗Anhui2株的雜交瘤細(xì)胞株,分別命名為1-5和3-6G。通過效價的測定,兩株單抗的細(xì)胞上清效價均為1:1000,腹水效價分別為1:10000和1:1000。經(jīng)中和實(shí)驗(yàn)測定,2株雜交瘤細(xì)胞均具有中和活性,并且特... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Anhui2病毒粒子電子顯微鏡圖片

圖 2.2 免疫小鼠血清抗體效價Fig.2.2 The antibody titers of BALB/c mouse immunized with Anhui2胞的篩選胞置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隨著時間的延長，未成功融合的細(xì)胞就會漸漸觀察到很多的細(xì)胞碎片。而成功融合的細(xì)胞狀態(tài)會越來越好，形成細(xì)液后，用建立的 ELISA 方法進(jìn)行陽性細(xì)胞的篩選，本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過 3 次連能穩(wěn)定分泌抗 Anhui2 病毒株的雜交瘤細(xì)胞，分別命名為 1-5 和 3-6G單克隆抗體的制備胞在 BALB/c 小鼠腹腔培養(yǎng)一周后，可以明顯的看到小鼠腹部開始脹無菌針頭在超凈臺里收集腹水。第一次收集腹水時，不可收集太多（致小鼠死亡），每只小鼠可收集 5mL 左右，收集的腹水在 4℃條件下去細(xì)胞沉淀和油脂，取上清，放入-80℃?zhèn)溆谩?

圖 2.3 分泌 1-5 和 3-6G 抗體雜交瘤細(xì)胞的穩(wěn)定性Fig.2.3 The stability of the hybridoma cells to produce antibodies 1-5 and 3-6G原的純化一步就是進(jìn)行小鼠的免疫，而免疫的前提就是獲得純化的抗原。小鼠的免疫效價也越高。這樣也越容易獲得分泌相應(yīng)抗體的雜交會減輕。因此獲得高純度的抗原就是成功制備單克隆抗體的前提的性質(zhì)不穩(wěn)定、來源有限、及不易提純，往往使用的是初步提純了后續(xù)的工作量。本實(shí)驗(yàn)中的免疫原是參考實(shí)驗(yàn)室?guī)熜置鞒鰜淼降?Anhui2 株病毒接種于 10 日齡的 SPF 雞胚并用梯度濃度的蔗


本文編號：3058679