鴨病毒性肝炎（Duck Viral Hepatitis,DVH）是由鴨肝炎病毒（Duck Hepatitis virus,DHV）引起的雛鴨的一種急性、致死性疾病,由于其發(fā)病迅速且死亡率高,給養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。我國鴨病毒性肝炎主要是由DHAV-1和DHAV-3引起的,且比較常見的感染形式為兩種型混合感染,因此急需一種操作簡單、快速、成本低廉,且檢出抗體全面的的檢測方法。本研究首先以實驗室保存的攜帶1型和3型VP0/VP3/VP1的重組質(zhì)粒pMD18T-DHAV-1-1/2和pMD18T-DHAV3-1/2為模板,通過PCR擴增得到DHAV-1/3-VP0、DHAV-1/3-VP3和DHAV-1/3-VP1目的基因,將其克隆至pET-30a（+）和pET-32a（+）原核表達載體中,進行蛋白的原核表達,獲得了Rosetta-pET30a-DHAV1/3-VP0、Rosetta-pET32a-DHAV1/3-VP1和Rosetta-pET30a-DHAV1/3-VP3重組蛋白。以純化后的重組蛋白為抗原,利用Western Blot分別與同型和異型的鴨血清抗體進行免疫反應(yīng)性分析,結(jié)... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

鴨肝炎病毒基因組結(jié)構(gòu)示意圖

結(jié)果與分析表 3-14 特異性反應(yīng)試驗結(jié)果Table 3-14 The results of intercross test for ELISA抗體Antibody鴨病毒性腸炎DEV鴨源小鵝瘟GPV禽流感H9N2 亞型鴨坦布蘇DTMUVDHAV-1 陽性對照DHAV-1PositivecontroDHAV-3 陽性對照DHAV-3Positivecontrol陰性對照NegativecontrolOD450nm0.202 0.214 0.126 0.109 1.298 0.985 0.192判定結(jié)果 - - - - + + -3.5 敏感性試驗DHAV-1 和 DHAV-3 血清各 3 份，分別選擇抗體水平較強的、較弱的及陰性血清三種進行檢測，將血清從 1:20 起進行倍比稀釋，其余條件按最佳反應(yīng)條件進行 ELISA 檢測，檢測結(jié)果間圖 3-10。結(jié)果表明，檢測 DHAV-1 血清，最低檢出量為 1:640，結(jié)果見圖 A；檢測 DHAV-3血清，最低檢出量為 1:320，結(jié)果如圖 B，綜上所述，本研究建立的方法的最低檢出量為 1:320。

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)碩士學(xué)位論文體水平逐漸下降，到二免十二周時，鴨體內(nèi)抗體水平呈弱陽性，而后對母鴨進行第，到三免 4 周母鴨體內(nèi)抗體水平呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢。免疫 3 型 DHAV 的成年母鴨抗體水平上升的比較緩慢，首免第 2 周抗體水平開始轉(zhuǎn)陽，二免后母鴨體內(nèi)抗體水升，到第 6 周達到最高峰，峰值為 1.075，而后抗體水平逐漸下降，到二免十二周內(nèi)抗體水平呈弱陽性狀態(tài)，而后進行第三次免疫，三免后到三免第 4 周，母鴨體內(nèi)一直逐漸上升。免疫 1 型 DHAV 的鴨體內(nèi)抗體水平強于免疫 3 型 DHAV 的鴨體內(nèi)抗體抗體的變化趨勢相似，見圖 3-11。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]基于VP0蛋白的用以檢測1型鴨甲肝病毒抗體的間接ELISA的建立和應(yīng)用[J]. 齊曉燕,程安春,汪銘書,陳舜,賈仁勇,朱德康,劉馬峰,劉菲,楊喬,孫昆峰,陳孝躍.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2015(12)
[2]鴨1型甲肝病毒亞型VP3基因的克隆與原核表達[J]. 黃劍梅,傅秋玲,傅光華,萬春和,陳翠騰,陳珍,程龍飛,施少華,陳紅梅,黃瑜.  福建農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2015(05)
[3]基因C型鴨甲肝病毒競爭ELISA抗體檢測方法的建立[J]. 何美琳,張煥容,程方明,楊曉農(nóng),岳華.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2015(03)
[4]Ⅰ型鴨肝炎病毒基因C型株的分離與鑒定[J]. 張雪,龔文孝,胡勇,鄒忠,李冉,金梅林.  動物醫(yī)學(xué)進展. 2015(01)
[5]基于基因C型鴨甲肝病毒VP1重組蛋白的鴨甲肝病毒抗體ELISA檢測方法的建立[J]. 楊發(fā)龍,張煥容,程方明,岳華,湯承.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2014(07)
[6]一起鴨甲肝病毒1型和3型混合感染的研究報道[J]. 孫曉軍,任建亭,劉金鳳,楊勝富,馬秀麗.  家禽科學(xué). 2014(07)
[7]鴨甲肝病毒3型2012年山東分離株VP1基因的序列分析[J]. 徐倩,陳琳琳,張瑞華,楊蕾,謝之景,朱巖麗,姜世金,司興奎.  病毒學(xué)報. 2013(05)
[8]鴨病毒性肝炎病毒高免卵黃抗體的免疫攻毒保護試驗[J]. 陳賢德,汪洋.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2013(12)
[9]新型鴨肝炎病毒GD1株VP1結(jié)構(gòu)蛋白的基因分析及B細胞抗原表位預(yù)測[J]. 范衛(wèi)國,杜佳慧,曹瑞兵,陳溥言.  畜牧與獸醫(yī). 2011(01)
[10]鴨肝炎病毒分子流行病學(xué)分析[J]. 袁率珍,范書才,李虹,姜畔,張兵.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2010(11)

碩士論文
[1]基于密碼子優(yōu)化的VP1基因表達蛋白檢測1型和3型鴨甲肝病毒抗體的膠體金試紙條[D]. 卿莉.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]1型鴨甲肝病毒VP3蛋白間接ELISA方法的建立及其B細胞表位鑒定[D]. 沈友林.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]鴨甲肝病毒1型和3型抗體間接ELISA檢測方法的建立與應(yīng)用[D]. 張玉瑤.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[4]I型鴨肝炎病毒VP1蛋白的表達純化及單克隆抗體的制備[D]. 張婷婷.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[5]鴨肝炎病毒抗原性鑒定及相關(guān)基因分析[D]. 袁率珍.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 2010
[6]Ⅰ型鴨肝炎病毒LY0801株的分離鑒定及致病性研究[D]. 高繼明.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[7]鴨肝炎病毒單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用[D]. 楊萍萍.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004
[8]鴨肝炎病毒免疫種鴨抗體消長規(guī)律及其雛鴨母源抗體變化的研究[D]. 樊景鳳.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2000



本文編號：3058664