2009年本實(shí)驗(yàn)室展光建等人從犬中分離到一株新型H5N2亞型流感病毒，隨后宋倩倩等人又通過(guò)致病性實(shí)驗(yàn)證明該亞型的病毒在犬間進(jìn)行水平傳播，這也進(jìn)一步警示人們?cè)搧喰土鞲胁《究赡軙?huì)成為潛在的流行毒株。為揭示該亞型病毒在自然犬的流行情況以及其在自然狀態(tài)下的變異情況，本研究對(duì)該亞型流感病毒進(jìn)行了病原學(xué)調(diào)查，并采用分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)其HA、NA、NP基因進(jìn)行了序列分析。本研究共采集了96份疑似流感病毒感染的病犬的鼻拭子樣品，對(duì)樣品進(jìn)行常規(guī)處理，接種9-11日齡的雞胚，進(jìn)行病毒分離鑒定，成功分離到三株病毒，經(jīng)血凝試驗(yàn)/血凝抑制試驗(yàn)、RT-PCR以及基因序列分析，這三株病毒均為H5N2亞型流感病毒，分別將這3株H5N2亞型流感病毒命名為A/Canine/Shan Dong/01/2012（H5N2）、A/Canine/Shan Dong/02/2012（H5N2）、A/Canine/Shan Dong/03/2012（H5N2），以上病毒簡(jiǎn)稱為CA/SD/01/12（H5N2）、CA/SD/02/12（H5N2）、CA/SD/03/12（H5N2）。三株病毒的HA蛋白上有許多受體結(jié)合位點(diǎn)，這些結(jié)合位點(diǎn)上... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

流感病毒結(jié)構(gòu)圖

項(xiàng)目 用量目的基因片段 3.5μlpMD18-T vector 0.5μlSolution Ⅰ 5μl雙蒸水 1ul總計(jì) 10ul表 5. 重組載體的連接體系Table5. The connection system of recombinant vector圖 2.PMD18-T Vector 結(jié)果示意圖Fig.2 The structure of PMD18-T Vector

Madison. WI）； 再用ClustalX（Version 2.1）對(duì)序列進(jìn)行多序列比對(duì)分發(fā)生分析則通過(guò)PHYLIP （Version 3.69）軟件進(jìn)行，用MEGA4進(jìn)行編輯系統(tǒng)發(fā)最后通過(guò)treeview軟件繪制最終的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。果 病原分離鑒定結(jié)果011年9月到2012年3月期間，從山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院以及周?chē)鷮櫸镝t(yī)院采集9癥狀疑似流感病例的鼻棉拭子的樣品，棉拭子樣品經(jīng)過(guò)處理之后接種大量SPF雞每個(gè)樣品第一次都接種3個(gè)雞胚，每個(gè)雞胚收集到的尿囊液都經(jīng)過(guò)3次以上的傳代最后從眾多的尿囊液中我們得到了3例血凝效價(jià)比較穩(wěn)定的病毒尿囊液。這些尿毒病毒能在72 h內(nèi)致死雞胚，可凝集雞的紅細(xì)胞，并能夠?qū)е码u胚大面積的嚴(yán)重血凝及血凝抑制結(jié)果見(jiàn)下圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小鼠感染流感病毒后可抵抗致死性流感病毒攻擊的研究[J]. 劉麗琦,李梓,朱云,舒躍龍.  中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志. 2012 (06)
[2]LNA探針同時(shí)檢測(cè)人副流感病毒1,2,3型多重?zé)晒舛縍T-PCR方法的建立[J]. 姬奕昕,毛乃穎,王煥煥,謝正德,許文波.  中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志. 2012 (05)
[3]A型H1N1流感病毒2009年血凝素蛋白變異分析[J]. 武治印,胡勁松.  鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2012(05)
[4]H3N2亞型犬流感病毒重組HA1蛋白間接ELISA檢測(cè)方法的建立[J]. 黃柏槐,張敦偉,遠(yuǎn)立國(guó),張桂紅,李守軍.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(09)
[5]應(yīng)用中空纖維柱和凝膠色譜純化雞胚流感病毒[J]. 楊欣,劉杰,劉瑛,吳永林,范鳳鳴,劉輝,張鵬艷,李玉華.  中國(guó)生化藥物雜志. 2012(04)
[6]流感病毒H3N2神經(jīng)氨酸酶雙點(diǎn)突變對(duì)病毒抗藥性影響的研究[J]. 董長(zhǎng)穎,韓冰孝.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(08)
[7]大流行甲型H1N1流感病毒變異株的小鼠感染實(shí)驗(yàn)研究[J]. 劉志輝,姜濤,劉娟,年慶功,秦鄂德,冉多良,秦成峰.  軍事醫(yī)學(xué). 2012(07)
[8]高增殖性能犬流感CIV-PR8重組病毒的制備[J]. 周潔文,滕巧泱,閆麗萍,邊延峰,張旭,徐大偉,石迎,周雨霞,李澤君.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(07)
[9]斑鳩對(duì)H9N2亞型禽流感病毒的易感性及其流感病毒受體類型的研究[J]. 丁佩佩,劉月煥,陳明勇,韓春華,林健,韓婧雯,潘潔.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(12)
[10]天津地區(qū)兒童急性呼吸道感染病毒病原檢測(cè)分析[J]. 王維,林書(shū)祥,李勝英,張樺,黃敬孚.  天津醫(yī)藥. 2012(06)



本文編號(hào)：3056178