本文關(guān)鍵詞：豬3型腺病毒的分離與鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：豬3型腺病毒(PAdV-3)為嗜腸道型病毒,由于具有嚴(yán)格的宿主特異性,對(duì)豬無明顯的致病性,不需要額外的佐劑便可誘導(dǎo)較強(qiáng)的體液免疫、細(xì)胞免疫和黏膜免疫,可用于大規(guī)模生產(chǎn),因此PAdV-3是理想的疫苗載體。目前,豬3型腺病毒和豬5型腺病毒都已獲得全序列,已被應(yīng)用于載體疫苗并取得較好效果。為獲得豬3型腺病毒用于載體疫苗研究,本論文采集健康豬腸內(nèi)容物通過ST細(xì)胞進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)并對(duì)分離毒株的關(guān)鍵基因p IX、hexon進(jìn)行測(cè)序和分析,獲得如下結(jié)果:1.利用ST細(xì)胞連續(xù)傳代后,分離得到豬腺病毒毒株BJ14株(北京),Ben23、Ben29、Ben30、Ben33株(陜西)。2.對(duì)以上分離到的5株豬腺病毒hexon保守區(qū)序列(巢式PCR產(chǎn)物)、三株(Ben29、Ben30、Ben33)全長(zhǎng)hexon基因及Ben30株的全長(zhǎng)p IX基因進(jìn)行進(jìn)行擴(kuò)增、克隆和測(cè)序。同時(shí)用DNAStar、Clone Manager將其與GeneBank中登錄的豬3型腺病毒毒株(IAF、6618、PAdV-3)的hexon、pIX序列進(jìn)行序列變化、遺傳進(jìn)化關(guān)系、抗原位點(diǎn)分析。(1)通過對(duì)五個(gè)毒株的巢式PCR產(chǎn)物的序列比對(duì)分析后發(fā)現(xiàn),本實(shí)驗(yàn)室分離的五個(gè)毒株(Ben23、Ben29、Ben30、Ben33、BJ14)相互間的同源性在98.2%—99.7%之間。這5個(gè)毒株與與6618、IAF、PAV-3的同源性均在98.2%以上;與其他豬腺病毒的同源性在76%以下。(2)實(shí)驗(yàn)室毒株Ben29、Ben30、Ben33 hexon基因核苷酸序列分析表明:Ben33、Ben29、Ben30的同源性達(dá)81.6%以上;Ben29、Ben30與IAF、6618的同源性達(dá)99.5%以上;Ben33與IAF、6618的同源性達(dá)81.2%以上。(3)通過抗原表位預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn):實(shí)驗(yàn)室毒株Ben29、Ben30、Ben33與6618毒株的hexon抗原優(yōu)勢(shì)表位相同,與PAdV-5的hexon抗原優(yōu)勢(shì)表位存在較大差異。(4)通過對(duì)實(shí)驗(yàn)室毒株Ben30與6618毒株、IAF毒株、PAV-3毒株的pIX基因的序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn),Ben30的pIX的氨基酸與GenBank上公布的IAF毒株、6618毒株、經(jīng)典毒株相應(yīng)的片段比較,同源性達(dá)91%。綜合以上研究,本論文在國(guó)內(nèi)分離到豬3型腺病毒3株,研究結(jié)果可為進(jìn)一步進(jìn)行豬3型腺病毒感染性克隆的構(gòu)建以及對(duì)豬3型腺病毒進(jìn)行分子生物學(xué)的研究奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：豬3型腺病毒 pIX hexon基因 遺傳進(jìn)化分析
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 文獻(xiàn)綜述9-15
• 第一章 豬腺病毒的概述9-15
• 1.1 腺病毒的分子特征與基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)9-11
• 1.1.1 腺病毒的分子特征9
• 1.1.2 腺病毒的基因組結(jié)構(gòu)9-11
• 1.1.2.1 E1基因9-10
• 1.1.2.2 E2基因10
• 1.1.2.3 E3基因10-11
• 1.1.2.4 E4基因11
• 1.1.2.5 ITR11
• 1.2 流行病學(xué)11-12
• 1.2.1 易感動(dòng)物11-12
• 1.2.2 傳染源12
• 1.2.3 傳播途徑12
• 1.2.4 流行特點(diǎn)12
• 1.3 豬腺病毒的診斷12
• 1.3.1 血清學(xué)診斷12
• 1.3.2 分子生物學(xué)檢測(cè)12
• 1.4 豬腺病毒裁體的研究現(xiàn)狀12-15
• 1.4.1 豬3型腺病毒載體的構(gòu)建13
• 1.4.2 豬3型腺病毒作為表達(dá)載體的研究進(jìn)展13-15
• 試驗(yàn)研究15-33
• 第二章 豬3型腺病毒的分離與鑒定15-33
• 2.1 材料15-17
• 2.1.1 載體、細(xì)胞、菌株15
• 2.1.2 主要藥品及試劑15
• 2.1.3 溶液配制15-16
• 2.1.3.1 培養(yǎng)基及電泳相關(guān)溶液15-16
• 2.1.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)基及相關(guān)溶液16
• 2.1.4 主要儀器16-17
• 2.2 方法17-20
• 2.2.1 病料的收集與處理17
• 2.2.2 PCR引物設(shè)計(jì)17
• 2.2.3 病毒DNA的提取17-18
• 2.2.4 巢式PCR檢測(cè)18
• 2.2.5 PAdV-3 病原分離18
• 2.2.6 分離毒株DNA的提取18
• 2.2.7 豬3型腺病毒hexon、pIX序列的擴(kuò)增18-19
• 2.2.8 目的片段的獲得19
• 2.2.9 目的片段的連接19-20
• 2.2.10 轉(zhuǎn)化20
• 2.2.11 菌液PCR鑒定20
• 2.2.12 基因測(cè)序20
• 2.2.13 測(cè)序結(jié)果的處理與分析20
• 2.3 結(jié)果20-31
• 2.3.1 Nested-PCR檢測(cè)結(jié)果20-21
• 2.3.2 病原分離21
• 2.3.3 PCR擴(kuò)增hexon、p IX基因21-22
• 2.3.4 重組質(zhì)粒的PCR鑒定22-23
• 2.3.5 巢式PCR擴(kuò)增出的目的基因測(cè)序結(jié)果的分析23-28
• 2.3.5.1 分離毒株Ben23巢式PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果的分析23-24
• 2.3.5.2 分離毒株Ben29巢式PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果的分析24-25
• 2.3.5.3 分離毒株Ben30巢式PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果的分析25
• 2.3.5.4 分離毒株Ben33巢式PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果的分析25-26
• 2.3.5.5 分離毒株BJ14巢式PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果的分析26
• 2.3.5.6 巢式PCR產(chǎn)物遺傳變異分析26-28
• 2.3.6 hexon基因核苷酸序列分析及發(fā)育系統(tǒng)分析28-29
• 2.3.7 hexon基因的抗原性分析29-30
• 2.3.8 PCR擴(kuò)增出的pIX基因測(cè)序結(jié)果分析30-31
• 2.4 討論31-32
• 2.5 小結(jié)32-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 縮略詞表37-38
• 致謝38-39
• 作者簡(jiǎn)介39

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳娜娜;向冬喜;鄭叢龍;;腺病毒及其研究進(jìn)展[J];大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年05期

2 黃國(guó)虹;許文波;;腺病毒新型別的研究進(jìn)展[J];病毒學(xué)報(bào);2013年03期

3 馬春玲;盧山;;人類腺病毒受體的研究進(jìn)展[J];微生物與感染;2008年04期

4 王芳;蘇曉波;張嵐;;Varp過表達(dá)降低腺病毒感染細(xì)胞效率的研究[J];激光生物學(xué)報(bào);2013年05期

5 陳兆平;周憶萍;胡誕寧;;眼部腺病毒感染:第一部份 流行性角膜結(jié)膜炎病原體分離和鑒定[J];眼科研究;1983年02期

6 尚守禮;叢樹梅;彭永范;;濟(jì)南地區(qū)腺病毒感染的病原學(xué)研究[J];微生物學(xué)報(bào);1966年01期

7 王素華;;以腺病毒為載體的基因療法[J];檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊;2009年02期

8 趙俊麗;夏海濱;;腺病毒的標(biāo)記方法[J];生命的化學(xué);2010年04期

9 高步先;張德禮;;人類腺病毒分子生物學(xué)及用作基因工程載體的特性[J];生物工程進(jìn)展;1997年01期

10 黃志英;程寶金;林紅;張小玉;萬瑜;;80例住院患兒腺病毒呼吸道感染的流行病學(xué)特點(diǎn)和臨床特征分析[J];病毒學(xué)報(bào);2014年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 卓婕;孫永昌;李莉;段招軍;;一種新型腺病毒引起的重癥肺炎及其傳播:病例報(bào)告[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2011（第十二次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議）論文匯編[C];2011年

2 閆明哲;熊鷹;劉映樂;;武漢市兒童2010-2012年腺病毒呼吸道感染的分子流行病學(xué)調(diào)查[A];2012年湖北生物產(chǎn)業(yè)發(fā)展高端論壇暨湖北省生物工程學(xué)會(huì)2012年度學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2012年

3 東麗麗;盧美萍;馬莉亞;陳志敏;滕麗萍;徐益萍;顧偉忠;;2006-2012年杭州地區(qū)兒童下呼吸道腺病毒感染流行情況調(diào)查[A];2012年江浙滬兒科學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)、兒內(nèi)科疾病診治新進(jìn)展國(guó)家級(jí)學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2012年

4 馬莉亞;東麗麗;盧美萍;滕麗萍;鐘永興;徐益萍;徐迎春;王穎碩;鮑興兒;陳志敏;;479例兒童下呼吸道腺病毒感染的臨床特征分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2012年

5 馬莉亞;東麗麗;盧美萍;鐘永興;徐迎春;王穎碩;鮑興兒;陳志敏;滕麗萍;徐益萍;;479例兒童下呼吸道腺病毒感染的臨床特征分析[A];2012年江浙滬兒科學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)、兒內(nèi)科疾病診治新進(jìn)展國(guó)家級(jí)學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2012年

6 李子建;劉元東;靳曉紅;崔玉玲;黃尉初;;一起由腺病毒引起的發(fā)熱性呼吸道傳染病疫情的調(diào)查[A];華東地區(qū)第十次流行病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨華東地區(qū)流行病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議20周年慶典論文匯編[C];2010年

7 馬莉亞;東麗麗;盧美萍;滕麗萍;鐘永興;徐益萍;徐迎春;王穎碩;鮑興兒;陳志敏;;479例兒童下呼吸道腺病毒感染的臨床特征分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國(guó)兒科呼吸學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

8 陳剛;沈小燕;林旭;林麗香;;NF-κB特異的RNAi腺病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖凋亡的影響[A];2008中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)內(nèi)分泌代謝科醫(yī)師分會(huì)年會(huì)論文匯編[C];2008年

9 陳剛;喬玉芳;林旭;林麗香;;NF-κB特異的RNAi腺病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖凋亡的影響[A];2008中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)內(nèi)分泌代謝科醫(yī)師分會(huì)年會(huì)論文匯編[C];2008年

10 李全海;胡潔;魏林;;替代的11型或35型刺突的5型腺病毒可提高對(duì)人細(xì)胞的感染性并可通過CD46依賴和CD46非依賴感染方式表達(dá)目的基因[A];河北省免疫學(xué)會(huì)第六次免疫學(xué)大會(huì)資料匯編[C];2010年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 湖南省兒童醫(yī)院 張聰;腺病毒也是腹瀉“元兇”[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2012年

2 武漢大學(xué)人民醫(yī)院副研究員 羅照春;感染病毒 可致肥胖[N];健康報(bào);2007年

3 記者 盧麗濤;保定部隊(duì)醫(yī)院腺病毒疫情已被控制[N];第一財(cái)經(jīng)日?qǐng)?bào);2012年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 薛惠斌;腺病毒CNHK200-hEndostatin的質(zhì)量控制及其大規(guī)模擴(kuò)增、純化的初步研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

2 陳清烽;靶向CX3CL1的RNA干擾在病毒性肝炎及癌癥中的治療作用[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 紀(jì)鳳仙;鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗的研制及其免疫原性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 翟偉;豬3型腺病毒的分離與鑒定[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

3 王s，

本文編號(hào)：305399