本研究旨在通過(guò)構(gòu)建pGEX-4T-1-Cap原核表達(dá)載體,制備豬圓環(huán)病毒3型（PCV3）重組核衣殼（Cap）蛋白抗原。將密碼子優(yōu)化的PCV3 Cap全基因插入pGEX-4T-1載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-4T-1-Cap,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞中,篩選出最佳誘導(dǎo)條件,通過(guò)谷胱甘肽瓊脂糖樹(shù)脂純化重組Cap蛋白。結(jié)果表明,成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-4T-1-Cap;在IPTG終濃度為0.1 mmol/L、16℃誘導(dǎo)20 h的條件下,可獲得大量可溶性重組Cap蛋白,SDS-PAGE結(jié)果表明分子質(zhì)量在51.6 ku,與預(yù)期相符;Western blotting分析表明經(jīng)純化的Cap蛋白與鼠抗GST單克隆抗體、PCV3兔源陽(yáng)性血清呈陽(yáng)性反應(yīng),進(jìn)一步證實(shí)了重組蛋白的表達(dá)。本研究表達(dá)并純化了PCV3 Cap重組蛋白,為新型基因工程亞單位疫苗的研制和ELISA血清學(xué)診斷方法的建立奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2020,47(08)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

pGEX-4T-1-Cap重組蛋白IPTG誘導(dǎo)濃度優(yōu)化

pGEX-4T-1-Cap重組蛋白表達(dá)時(shí)間優(yōu)化

pGEX-4T-1-Cap重組蛋白在IPTG終濃度為0.1 mmol/L,16 ℃誘導(dǎo)20 h的條件進(jìn)行誘導(dǎo),SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示,重組蛋白在上清中表達(dá),大小為51.6 ku (圖3),與預(yù)期相符。2.3 pGEX-4T-1-Cap重組蛋白的純化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]核定位信號(hào)對(duì)病毒衣殼蛋白在E.coli中表達(dá)的影響及重組衣殼蛋白免疫學(xué)活性研究[D]. 張獻(xiàn).吉林大學(xué) 2019



本文編號(hào)：3050996