疫苗免疫是防控禽流感暴發(fā)流行、保障養(yǎng)禽業(yè)及人類健康的重要措施之一。當(dāng)前所用禽流感油乳劑滅活疫苗對(duì)蛋雞和蛋鴨免疫效果非常好，但免疫肉鴨抗體稍偏低，而且肉鴨生長周期短，白油佐劑疫苗吸收較慢，在一定程度上影響了養(yǎng)鴨者的免疫積極性。因此有必要系統(tǒng)研究鴨免疫后體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，比較不同佐劑禽流感滅活疫苗的免疫效果，篩選適合鴨，特別是肉鴨免疫的禽流感滅活疫苗佐劑，為水禽禽流感的疫苗免疫防控提供參考和借鑒。通過用HI試驗(yàn)監(jiān)測肉鴨母源抗體消長規(guī)律以及不同日齡雛鴨的抗強(qiáng)毒攻擊保護(hù)性研究，表明肉鴨也需要進(jìn)行免疫才能防止發(fā)生禽流感。結(jié)合不同日齡免疫抗體變化和生產(chǎn)實(shí)踐，確定肉鴨首免日齡為9到15日齡較為合適。為研究重組金黃色葡萄球菌腸毒素A（rSEA）對(duì)禽流感疫苗的免疫增強(qiáng)效果，制備了不同rSEA含量的禽流感油乳劑滅活疫苗。試驗(yàn)結(jié)果表明，白油佐劑疫苗中rSEA含量為16.7μg/0.5ml時(shí)，能明顯縮短保護(hù)性抗體產(chǎn)生時(shí)間，提高抗體滴度。試驗(yàn)確定了體外表達(dá)的未純化rSEA（rrSEA）不能增強(qiáng)SPF鴨對(duì)禽流感油乳劑滅活疫苗體液免疫應(yīng)答反應(yīng)；通過對(duì)滅活禽流感病毒液中加入不同含量的左旋咪唑的免疫抗體檢測，確定含0... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 禽流感概述
    1.2 禽流感疫苗概述
        1.2.1 禽流感全病毒滅活疫苗
        1.2.2 減毒活疫苗
        1.2.3 禽流感亞單位疫苗
        1.2.4 禽流感 DNA 疫苗
        1.2.5 基因重組活載體疫苗
    1.3 疫苗佐劑的研究現(xiàn)狀和未來發(fā)展趨勢
        1.3.1 疫苗佐劑的作用、選擇及安全性
        1.3.2 佐劑的分類
    1.4 機(jī)體抗流感病毒免疫應(yīng)答反應(yīng)
        1.4.1 禽類對(duì)高致病性禽流感的免疫機(jī)制
        1.4.2 疫苗免疫與病毒進(jìn)化
    1.5 本研究的目的和意義
第二章 肉鴨最佳首免日齡研究
    2.1 材料
        2.1.1 疫苗生產(chǎn)種毒及攻毒用毒株
        2.1.2 禽流感 Re-6 株標(biāo)準(zhǔn)抗原、陽性和陰性血清
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和雞胚
    2.2 方法
        2.2.1 攻毒毒株雞胚半數(shù)感染量（EID50）測定
        2.2.2 禽流感油乳劑滅活疫苗制備
        2.2.3 櫻桃谷肉鴨禽流感病毒攜帶情況和母源抗體消長規(guī)律監(jiān)測
        2.2.4 母源抗體攻毒保護(hù)試驗(yàn)
        2.2.5 不同日齡鴨免疫禽流感滅活疫苗 HI 抗體檢測
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 攻毒病毒株雞胚半數(shù)感染量（EID50）測定結(jié)果
        2.3.2 白油佐劑禽流感滅活疫苗制備檢測結(jié)果
        2.3.3 疫苗安全性檢驗(yàn)
        2.3.4 櫻桃谷肉鴨禽流感病毒攜帶情況和母源抗體消長規(guī)律監(jiān)測結(jié)果
        2.3.5 櫻桃谷肉鴨母源抗體攻毒保護(hù)結(jié)果
        2.3.6 不同日齡鴨免疫禽流感滅活疫苗 HI 抗體檢測
    2.4 討論
第三章 最佳含量的重組 SEA 和左旋咪唑禽流感滅活疫苗研究
    3.1 材料
        3.1.1 疫苗生產(chǎn)種毒、攻毒用毒株、菌種
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和雞胚
        3.1.3 儀器和主要試劑
    3.2 方法
        3.2.1 rSEA 的制備
        3.2.2 不同佐劑禽流感滅活疫苗的制備
        3.2.3 不同 rSEA 含量白油佐劑禽流感滅活疫苗免疫效果比較
        3.2.4 白油、白油+rSEA、白油+rrSEA 佐劑禽流感滅活疫苗免疫抗體比較
        3.2.5 左旋咪唑作為禽流感疫苗佐劑劑量優(yōu)化研究
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 重組 SEA SDS-PAGE 電泳及 western-blot 鑒定結(jié)果
        3.3.2 重組 SEA 對(duì)體外淋巴細(xì)胞的增殖活性試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.3 不同 rSEA 含量白油佐劑禽流感滅活疫苗免疫效果比較
        3.3.4 白油、白油+rSEA、白油+rrSEA 佐劑禽流感滅活疫苗免疫抗體比較
        3.3.5 左旋咪唑作為禽流感疫苗佐劑劑量優(yōu)化結(jié)果
    3.4 討論
第四章 不同佐劑禽流感滅活疫苗對(duì) SPF 鴨免疫效果研究
    4.1 材料
        4.1.1 疫苗種毒、攻毒用毒株
        4.1.2 禽流感 HI 試驗(yàn)抗原、陽性和陰性血清
        4.1.3 主要儀器
        4.1.4 疫苗佐劑
        4.1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和雞胚
    4.2 方法
        4.2.1 白油佐劑和白油+rSEA 佐劑禽流感滅活疫苗的制備
        4.2.2 蜂膠佐劑禽流感滅活疫苗的制備
        4.2.3 Montanide ISA 71VG 佐劑禽流感滅活疫苗的制備
        4.2.4 Montanide ISA 206VG 佐劑禽流感滅活疫苗的制備
        4.2.5 左旋咪唑佐劑、rSEA 佐劑及無佐劑禽流感滅活疫苗的制備
        4.2.6 不同佐劑禽流感疫苗安全性檢驗(yàn)
        4.2.7 試驗(yàn)分組、疫苗免疫及攻毒保護(hù)效果研究
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 不同佐劑禽流感滅活疫苗安全性檢驗(yàn)
        4.3.2 油乳劑禽流感滅活疫苗免疫 SPF 鴨抗體研究
        4.3.3 蜂膠和水劑禽流感滅活疫苗免疫 SPF 鴨后抗體檢測
        4.3.4 不同佐劑禽流感滅活疫苗免疫后攻毒保護(hù)情況
    4.4 討論
第五章 鴨 IFN-γ和 IL-2 mRNA 熒光定量 RT-PCR 方法的建立
    5.1 材料
    5.2 方法
        5.2.1 實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR 用引物設(shè)計(jì)與合成
        5.2.2 肉鴨組織 Total RNA 樣品的制備和質(zhì)量鑒定
        5.2.3 常規(guī) PCR 反應(yīng)體系和條件優(yōu)化
        5.2.4 熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)體系和條件優(yōu)化及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        5.2.5 特異性、穩(wěn)定性和重復(fù)性檢測
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 組織提取 Total RNA 質(zhì)量鑒定
        5.3.2 常規(guī) PCR 反應(yīng)體系和條件優(yōu)化
        5.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)體系和條件優(yōu)化及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線建立
        5.3.4 特異性、穩(wěn)定性和重復(fù)性
    5.4 討論
第六章 不同佐劑禽流感滅活疫苗對(duì)肉鴨的免疫效果研究
    6.1 材料
        6.1.1 禽流感滅活疫苗以及攻毒用毒株
        6.1.2 主要儀器、材料和試劑
        6.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和雞胚
    6.2 方法
        6.2.1 不同佐劑禽流感滅活疫苗免疫肉鴨后的免疫反應(yīng)及疫苗吸收檢測
        6.2.2 不同佐劑禽流感滅活苗對(duì)櫻桃谷鴨免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)
        6.2.3 統(tǒng)計(jì)分析方法
    6.3 結(jié)果
        6.3.1 不同佐劑禽流感滅活疫苗免疫櫻桃谷肉鴨 HI 抗體檢測
        6.3.2 不同佐劑禽流感滅活疫苗對(duì)櫻桃谷肉鴨外周血淋巴細(xì)胞增殖活性的影響
        6.3.3 不同佐劑禽流感滅活疫苗免疫櫻桃谷肉鴨脾臟中IFN-γ和IL-2 mRNA表達(dá)量的檢測
        6.3.4 不同佐劑疫苗免疫肉鴨后疫苗代謝吸收情況
        6.3.5 不同佐劑禽流感滅活疫苗對(duì)櫻桃谷肉鴨免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)
    6.4 討論
第七章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]AA肉雞免疫禽流感油乳劑滅活疫苗細(xì)胞免疫應(yīng)答的變化[J]. 王彥妮,曾顯營,田國彬,蘇文,陳化蘭.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(02)
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[6]左旋咪唑?qū)﹄u新城疫抗體滴度的影響[J]. 宋修春,許秋菊,王春玲.  家禽科學(xué). 2007(05)
[7]H5N1亞型禽流感病毒HA基因在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)及其生物活性鑒定[J]. 張曉霽,劉明,劉春國,楊濤,張?jiān)?  中國生物工程雜志. 2007(03)
[8]蜂膠的免疫增強(qiáng)作用及其在疫苗中的應(yīng)用[J]. 王茹,謝印乾,沈志強(qiáng),繆曉青.  中國畜牧獸醫(yī). 2007(02)
[9]鴨GAPDH基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR方法的建立[J]. 楊發(fā)龍,岳華,謝秀蘭,賈文祥.  西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(01)
[10]蜂膠佐劑在畜禽疫苗中的應(yīng)用[J]. 裴志花,王開.  吉林畜牧獸醫(yī). 2007(01)

碩士論文
[1]禽流感核酸疫苗免疫保護(hù)性研究[D]. 邱美珍.湖南師范大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3050982