伏馬毒素B1（Fumonisin B1,FB1）多產(chǎn)自串珠鐮刀菌等真菌,是一種污染廣泛的霉菌毒素。FB1對多種動物具有毒性作用,如豬肺水腫、馬腦白質(zhì)軟化,不僅危害動物健康,而且造成巨大經(jīng)濟損失。目前還未見體內(nèi)有效清除FB1的方法。為了尋找可以快速高效清除或吸附FB1的物質(zhì)并探究其體內(nèi)體外的保護作用,本試驗中利用鏈霉親和素磁珠與生物素探針的親和作用,采用非固定靶標的SELEX篩選策略獲得了適配體F102。采用ELISA試驗測定其親和力為42.0±13.7 nmol/L,特異性良好,與玉米赤霉烯酮、T-2毒素和黃曲霉毒素B1的交叉反應(yīng)較低。利用分子模擬方法推測適配體和FB1的結(jié)合機制,結(jié)果發(fā)現(xiàn)FB1的羰基“O”原子與適配體F102的A-8,A-39,A-40和A-42主要是氫鍵作用。原代培養(yǎng)小鼠腎細胞,不同濃度FB1（終濃度為0-20,000 ng/mL）處理小鼠腎細胞24 h后確定FB1的損傷濃度為2,500 ng/mL。不同濃度適配體（終濃度為0-100μmol/L）處理小鼠腎細胞24 h后確定適配體的安全保護劑量為1μmol/L。適配體F102和F39分別與FB1共同處理小鼠腎細胞2... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 霉菌毒素概述
        1.1.1 霉菌毒素的產(chǎn)生
        1.1.2 霉菌毒素的污染與危害
        1.1.3 霉菌毒素的檢測技術(shù)
        1.1.4 霉菌毒素的防控
    1.2 FB1簡介
        1.2.1 FB1的基本性質(zhì)
        1.2.2 FB1的污染狀況
        1.2.3 FB1的毒性作用及限量
        1.2.4 FB1的檢測和清除方法
    1.3 適配體概述
        1.3.1 適配體的的性質(zhì)及特點
        1.3.2 SELEX技術(shù)
        1.3.3 適配體的應(yīng)用發(fā)展
    1.4 分子模擬簡介
        1.4.1 分子模擬技術(shù)
        1.4.2 分子模擬的方法
        1.4.3 分子模擬的應(yīng)用
    1.5 本研究的目的與意義
2 材料
    2.1 毒素及磁珠
    2.2 實驗動物
    2.3 引物及分子模擬軟件
        2.3.1 分子模擬軟件
        2.3.2 引物
    2.4 酶及生化試劑
    2.5 主要儀器和設(shè)備
3 方法
    3.1 FB1適配體的篩選
        3.1.1 ssDNA文庫的固定
        3.1.2 SELEX篩選過程
        3.1.3 PCR擴增
        3.1.4 擴增文庫的回收與純化
        3.1.5 親和力和特異性的測定
        3.1.6 適配體與FB1的分子模擬
    3.2 適配體體外緩解FB1誘導(dǎo)小鼠腎細胞損傷機制
        3.2.1 小鼠腎細胞的培養(yǎng)
        3.2.2 FB1損傷濃度的測定
        3.2.3 適配體安全及保護劑量的選擇
        3.2.4 適配體對FB1誘導(dǎo)腎細胞損傷的保護
    3.3 適配體體內(nèi)緩解FB1誘導(dǎo)小鼠組織損傷機制
        3.3.1 動物感染試驗
        3.3.2 小鼠臟器指數(shù)的測定
        3.3.3 FB1組織殘留量的測定
        3.3.4 血液生化指標的測定
        3.3.5 腎組織氧化指標的測定
        3.3.6 腎組織細胞凋亡情況的測定
        3.3.7 統(tǒng)計學(xué)處理
4 結(jié)果與分析
    4.1 FB1適配體的篩選分析
        4.1.1 篩選條件的優(yōu)化
        4.1.2 篩選過程的監(jiān)控
        4.1.3 同源序列的富集比對
        4.1.4 親和力及特異性的測定
        4.1.5 特異性適配體的結(jié)構(gòu)預(yù)測
        4.1.6 適配體與FB1的結(jié)合機制
    4.2 適配體緩解FB1誘導(dǎo)小鼠腎細胞損傷的毒性研究
        4.2.1 FB1損傷濃度的確定
        4.2.2 適配體安全劑量的選擇
        4.2.3 適配體對FB1誘導(dǎo)腎細胞損傷的保護
    4.3 適配體緩解FB1誘導(dǎo)腎組織損傷的毒性研究
        4.3.1 腎組織中FB1殘留量
        4.3.2 適配體對FB1損傷小鼠腎組織病理變化的影響
        4.3.3 適配體對FB1損傷小鼠腎組織臟器指數(shù)的影響
        4.3.4 適配體對FB1損傷小鼠血液生化指標的影響
        4.3.5 適配體對FB1損傷小鼠腎組織氧化指標的影響
        4.3.6 適配體對FB1損傷腎組織細胞凋亡情況的影響
5 討論
    5.1 適配體篩選方法的選擇
    5.2 適配體篩選的富集過程
    5.3 適配體親和力的比較
    5.4 適配體與FB1的結(jié)合機制
    5.5 適配體緩解FB1損傷的病理變化
    5.6 適配體緩解FB1損傷的血液生化水平
    5.7 適配體緩解FB1氧化損傷的機制
    5.8 適配體緩解FB1誘導(dǎo)凋亡的機制
6 結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻】：
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本文編號：3051065