為了避免結(jié)核檢疫中PPD檢測假陽性牛被錯誤的撲殺,預(yù)防奶牛養(yǎng)殖場結(jié)核病的流行擴(kuò)散,維護(hù)公共衛(wèi)生安全,保障畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,本研究建立了可以區(qū)分結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌的多重PCR方法,并以石河子地區(qū)部分牛場存欄奶牛以及養(yǎng)殖場麻雀為調(diào)查對象,進(jìn)行了初步應(yīng)用。首先,進(jìn)行分支桿菌標(biāo)準(zhǔn)株的復(fù)蘇與培養(yǎng)。試驗以結(jié)核分枝桿菌H37Ra、卡介苗BCG、禽分支桿菌、胞內(nèi)分支桿菌、偶發(fā)分支桿菌、恥垢分支桿菌、龜分支桿菌為分支桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌,其中H37Ra、BCG總DNA取自醫(yī)學(xué)院民族高發(fā)病實(shí)驗室,并完成了分支桿菌主要培養(yǎng)基的配制、龜分支桿菌凍干粉的復(fù)蘇培養(yǎng),禽分支桿菌、胞內(nèi)分支桿菌、偶發(fā)分支桿菌、恥垢分支桿菌的培養(yǎng)。其次,為了建立一種快速區(qū)分鑒定結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌的多重PCR方法,以分支桿菌屬特異基因32kD,結(jié)核分枝桿菌種特異基因MTP40和結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群特異基因IS6110為目標(biāo)基因,設(shè)計合成三對特異性引物,以結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株DNA為模板,通過對PCR反應(yīng)體系中DNA模板濃度、Mg2+濃度、dNTPs濃度、引物濃度和TaqDNA聚合酶濃度5個因素的正交設(shè)計,以及PCR反應(yīng)條件中各反應(yīng)參數(shù)的優(yōu)化,建立了... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

龜分支桿菌培養(yǎng)結(jié)果

結(jié)核 與 非結(jié) 核 分支 桿 菌多 重 P CR 方 法的 建 立及 初 步應(yīng) 用 2 . 2 偶 發(fā) 分 支 桿 菌快 速 生 長 、接 種 后 2 4 h 可 見 黃 白 色 粗 糙 菌 落 、不 能 使 培 養(yǎng) 基 表 面 變 色（ 圖 1 . 2B ） , 抗 酸 染 色 呈 紅 色 長 桿 狀 （ 圖 1 . 2 C ） 。

A B C圖 1 . 2 偶 發(fā) 分 支 桿 菌 培 養(yǎng) 結(jié) 果F i g u r e 1 . 2 o c c a s i o n a l m y c o b a c t e r i a l c u l t u r e r e s u l t s ： A 、 B 、 C 分 別 是 培 養(yǎng) 基 表 面 狀 態(tài) 、 菌 落 1 0 0 倍 放 大 結(jié) 果 、 1 0 0 X 1 0 抗 酸 染 色 結(jié) 果2 . 3 恥 垢 分 支 桿 菌快 速 生 長 、 接 種 后 2 4 小 時 可 見 黃 白 色 粗 糙 菌 落 , 不 能 使 培 養(yǎng) 基 變 色 （ 圖 1 . 3 A 、B ） , 抗 酸 染 色 呈 紅 色 長 桿 狀 （ 圖 1 . 3 C ） 。


本文編號：3038556