禽白血病（Avian Leukosis）是由禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus,ALV）引起的具有傳染性的腫瘤性疾病。該病以水平和垂直兩種方式傳播,目前暫無可用疫苗以及有效的治療藥物,在世界各國養(yǎng)禽業(yè)廣泛流行,危害嚴重。種群凈化、降低感染率是防制病毒傳播的主要方式。禽白血病被列入2012～2020年國家中長期動物疫病防治規(guī)劃中的優(yōu)先防治病種之一。因而,建立快速、有效的禽白血病檢測方法對于臨床診斷、監(jiān)測、凈化是十分必要的。p27蛋白是禽白血病基因組中基因編碼的群特異性抗原,是ALV核心衣殼蛋白的主要成分,有很多病毒抗原位點,常常作為檢測抗體的首選。本研究利用酵母表達系統(tǒng)對ALVp27基因進行表達,并且以該蛋白為包被抗原建立了禽白血病間接ELISA檢測方法,為p27蛋白的大規(guī)模生產(chǎn)以及禽白血病檢測試劑盒的進一步研制提供理論基礎(chǔ)。禽白血病p27基因在畢赤酵母中的表達根據(jù)Gene Bank中已發(fā)表的禽白血病基因全序列中p27基因的序列,用PrimerPremeir5.0軟件設(shè)計含EcoR I和Not I酶切位點的一對特異性引物,以ALVRNA為模板,RT-PCR擴增目的基因... 

【文章來源】：延邊大學吉林省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
    1 禽白血病的研究進展
        1.1 禽白血病的病原學
        1.2 禽白血病的流行病學
        1.3 臨床癥狀與病理變化
        1.4 禽白血病的檢測方法
        1.5 禽白血病的防控
    2 畢赤酵母表達系統(tǒng)的研究進展
        2.1 酵母表達系統(tǒng)
        2.2 畢赤酵母表達的菌株
        2.3 畢赤酵母的載體
        2.4 影響外源蛋白表達的主要因素
    3 研究的目的與意義
材料與方法
    1 材料
        1.1 毒株、細胞與血清
        1.2 載體與工具酶
        1.3 主要試劑與試劑盒
        1.4 主要溶液與培養(yǎng)基配制
    2 方法
        2.1 禽白血病病毒p27基因在畢赤酵母中的表達
        2.2 禽白血病間接ELISA檢測方法的建立
結(jié)果
    1 p27基因表達的結(jié)果
        1.1 p27基因PCR擴增結(jié)果
        1.2 pMD-p27克隆質(zhì)粒的雙酶切鑒定
        1.3 測序結(jié)果分析
        1.4 pPIC9K-p27酵母表達株的鑒定
        1.5 畢赤酵母轉(zhuǎn)化子的PCR鑒定
        1.6 p27蛋白的鑒定結(jié)果
        1.7 蛋白表達條件的優(yōu)化
        1.8 p27蛋白的純化結(jié)果
    2 間接ELISA方法建立的結(jié)果
        2.1 最佳抗原包被濃度和血清的稀釋度確定
        2.2 二抗稀釋度的確定
        2.3 封閉劑的確定
        2.4 封閉時間的確定
        2.5 待檢血清最佳作用時間的確定
        2.6 二抗最佳反應時間確定
        2.7 最佳顯色時間的確定
        2.8 陰陽性臨界值的確定
        2.9 符合性試驗
        2.10 特異性試驗
        2.11 重復性試驗
        2.12 臨床樣本檢測結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介
附錄


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[10]山東地區(qū)禽白血病發(fā)病雞群的流行病學調(diào)查及致病特性的研究[D]. 楊鳳.山東農(nóng)業(yè)大學 2011



本文編號：3035921