豬乙型腦炎又稱之為日本乙型腦炎（Japanese encephalitis）,是由日本乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的一種人畜共患急性傳染病。JEV感染主要引發(fā)豬繁殖障礙疾病,接種豬乙型腦炎病毒滅活疫苗能有效預(yù)防和控制該病。本研究從疑似豬乙型腦炎的臨床病料中分離到1株JEV病毒,對(duì)其進(jìn)行了生物學(xué)鑒定和適應(yīng)性培養(yǎng)研究,并使用所培養(yǎng)的細(xì)胞適應(yīng)株作為免疫原成功制備了JEV的兔源高免血清。取流產(chǎn)胎兒腦組織經(jīng)處理后接種BHK21細(xì)胞,每日觀察細(xì)胞病變,連續(xù)觀察5天,然后連續(xù)盲傳。JEV分離株盲傳至第6代開始產(chǎn)生細(xì)胞病變,接種細(xì)胞36h觀察到輕微的細(xì)胞病變,48h時(shí),細(xì)胞病變達(dá)80%。針對(duì)JEV的E基因設(shè)計(jì)特異性引物,對(duì)盲傳后的病毒液進(jìn)行JEV的檢測(cè)。結(jié)果表明使用所建立的JEV RT-PCR檢測(cè)方法對(duì)產(chǎn)生細(xì)胞病變的分離株進(jìn)行檢測(cè)擴(kuò)增出特異性條帶,由此表明使用BHK21細(xì)胞成功分離到一株JEV病毒,將其命名為JEV-SC株。將檢測(cè)為陽(yáng)性的JEV繼續(xù)傳代使其適應(yīng)BHK21細(xì)胞,待出現(xiàn)細(xì)胞病變后通過(guò)蝕斑實(shí)驗(yàn)對(duì)所分離的病毒進(jìn)行純化。對(duì)純化后的病毒以及不同... 

【文章來(lái)源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 豬乙型腦炎病毒病原學(xué)
        1.1 豬乙型腦炎病毒的生物學(xué)特征
        1.2 JEV的培養(yǎng)特性
        1.3 JEV的基因表達(dá)
    2 豬乙型腦炎病毒疫苗的研究進(jìn)展
        2.1 乙型腦炎傳統(tǒng)型疫苗
            2.1.1 鼠腦滅活苗
            2.1.2 細(xì)胞滅活苗
            2.1.3 減毒活疫苗
        2.2 乙腦新型疫苗
            2.2.1 亞單位疫苗
            2.2.2 核酸疫苗
            2.2.3 病毒活載體疫苗
            2.2.4 復(fù)制型DNA疫苗
    3 流行病學(xué)
    4 JEV致病特點(diǎn)
        4.1 臨床癥狀
        4.2 病理變化
    5 診斷方法
        5.1 病原學(xué)診斷
        5.2 血清學(xué)檢測(cè)方法
        5.3 鑒別診斷
    6 防治措施
    7 研究目的及意義
第二章 豬乙型腦炎病毒SC株的分離鑒定
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞、菌種及載體
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及配制
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 病料采集
        2.2 病料處理
        2.3 病料RNA的提取
        2.4 引物設(shè)計(jì)
        2.5 反轉(zhuǎn)錄制備cDNA
        2.6 病毒的分離與培養(yǎng)
            2.6.1 復(fù)蘇BHK-21細(xì)胞
            2.6.2 病毒分離
        2.7 病毒的鑒定
            2.7.1 病毒的RT-PCR鑒定
            2.7.2 基因的克隆與鑒定
            2.7.3 病毒理化性質(zhì)鑒定
            2.7.4 間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)（IFA）
    3 結(jié)果
        3.1 病料檢測(cè)結(jié)果
        3.2 病毒的分離
        3.3 病毒的RT-PCR鑒定結(jié)果
        3.4 病毒理化性質(zhì)鑒定結(jié)果
        3.5 間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)（IFA）
    4 討論
第三章 豬乙型腦炎病毒SC株的純化及培養(yǎng)特性研究
    1 材料
        1.1 細(xì)胞與病毒
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及配制
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 JEV-SC株的純化
        2.2 JEV-SC株的外源病毒檢測(cè)
        2.3 JEV-SC株的適應(yīng)性培養(yǎng)
50的測(cè)定">        2.4 JEV-SC株病毒TCID₅₀的測(cè)定
        2.5 JEV-SC株在BHK-21細(xì)胞上的增殖規(guī)律
        2.6 JEV-SC株不同代次在BHK-21細(xì)胞上的增殖
        2.7 JEV-SC株分別在BHK-21、Vero細(xì)胞上的增殖
    3 結(jié)果
        3.1 JEV-SC株的純化
        3.2 JEV-SC株的外源病毒檢測(cè)
        3.3 JEV-SC株的適應(yīng)性培養(yǎng)
50的測(cè)定">        3.4 病毒TCID₅₀的測(cè)定
        3.5 JEV-SC株在BHK-21細(xì)胞上的增值規(guī)律
        3.6 JEV-SC株不同代次在BHK-21細(xì)胞上的增殖
        3.7 JEV-SC株分別在Vero和BHK-21細(xì)胞上的病變情況
    4 討論
        4.1 關(guān)于JEV適應(yīng)性培養(yǎng)
        4.2 關(guān)于JEV含量測(cè)定方法
        4.3 關(guān)于JEV的細(xì)胞增殖特性
第四章 豬乙型腦炎病毒高免血清的制備
    1 材料
        1.1 細(xì)胞與病毒
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及配制
        1.3 實(shí)驗(yàn)用具與器械
        1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.5 免疫原
    2 方法
        2.1 JEV-SC株毒種的檢驗(yàn)
            2.1.1 毒種的繁殖
            2.1.2 純粹性檢測(cè)
        2.2 免疫接種
            2.2.1 首次免疫
            2.2.2 二次免疫
            2.2.3 第三次免疫
            2.2.4 第四次免疫
        2.3 血液試檢
        2.4 兔頸動(dòng)脈放血采集血清
        2.5 血清的檢驗(yàn)
            2.5.1 無(wú)菌檢驗(yàn)
            2.5.2 特異性鑒定
        2.6 JEV-SC株高免血清的保存
    3 結(jié)果
        3.1 JEV-SC株毒種的檢驗(yàn)
        3.2 瓊脂雙擴(kuò)血清效價(jià)測(cè)定結(jié)果
        3.3 無(wú)菌檢驗(yàn)結(jié)果
        3.4 特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介及攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
附件


【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3033474