禽腦脊髓炎（avianencephalomyelitis，AE）首次在1932年被描述為一種侵害雛雞的一種病毒性傳染病。此后，已波及世界大多數(shù)國家，該病的特征是雛雞表現(xiàn)為頭和頸部的快速震顫和運(yùn)動共濟(jì)失調(diào)；產(chǎn)蛋雞被該病毒感染后表現(xiàn)為一過性產(chǎn)蛋下降，不表現(xiàn)出神經(jīng)癥狀，給養(yǎng)禽業(yè)尤其是種禽養(yǎng)殖業(yè)造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。目前傳統(tǒng)的禽腦脊髓炎病毒（avianencephalomyelitisvirus，AEV）的檢測方法存在費(fèi)時費(fèi)力、特異性差、容易被污染等缺點(diǎn)。因此，建立一種針對AEV的特異、敏感、可靠的檢測方法勢在必行。本研究旨在建立一種基于SYBRGreenI的AEV熒光定量RT-PCR檢測方法，為AE高效檢測及準(zhǔn)確定量提供一種可靠的新方法。結(jié)果如下：根據(jù)GeneBank中AEV1143株基因序列，在高度保守的VP1基因序列區(qū)域設(shè)計(jì)一對熒光定量用特異性引物，用RT-PCR的方法擴(kuò)增出AEVSX株VP1基因的部分序列（288bp），用常規(guī)方法對目的片段進(jìn)行克隆并進(jìn)行雙酶切鑒定，測定重組質(zhì)粒的濃度并通過測序比對進(jìn)行鑒定，重組質(zhì)粒的序列與AEVSX株的VP1基因序列100%匹配，質(zhì)粒濃度為126ng/... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

AEVSX株VP1基因片段PCR擴(kuò)增結(jié)果

計(jì)算重組質(zhì)粒濃度為 126 ng/μL， OD26為 3.99 × 1011拷貝/μL。條件的優(yōu)化結(jié)果試驗(yàn)，證明反應(yīng)體系為 20 uL 體系時ol/ul) 時特異性最強(qiáng)，擴(kuò)增效率最合M.DNA 標(biāo)準(zhǔn) DL 5 000;1 . 酶切鑒定；Marker DL 5000; 1.The enzyme digestion id 3-2 VP1 基因片段重組質(zhì)粒的酶切鑒定he enzyme digestion identification of VP1 g17

5 10 15 20 25 30 3Cycle107106103104105102NC. 無模板的陰性對照;NC. Negative control圖 3-6 熒光定量 RT-PCR 的敏感性Fig. 3-6 Sensitivity of the real-time PCR.


本文編號：3028187