間充質(zhì)干細(xì)胞具有自我更新和多向分化的能力,能在體外誘導(dǎo)成脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、骨細(xì)胞、肌細(xì)胞等,所以越來越多的研究集中在其增殖與分化機(jī)制方面。希望將其作為種子細(xì)胞,能夠在臨床壞死損傷組織器官的修復(fù)治療中起到一定作用。而脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（adipose mesenchymal stem cells, AMSCs）取討方便,來源較為豐富。本試驗(yàn)利用hedgehog信號(hào)通路的特異性抑制劑cyclopamine（CPA）,對(duì)牛AMSCs的細(xì)胞分裂周期及成骨與成脂誘導(dǎo)分化的機(jī)制做了初步探討。我們首先獲得牛AMSCs,然后用CPA處理AMSCs,用real-time PCR方法檢測(cè)不同時(shí)期周期蛋白cyclinA、cyclinD、cyclinE、及定向分化過程中關(guān)鍵基因的表達(dá)。主要開究成果如下：（1）采用膠原酶Ⅳ法消化分離,體外培養(yǎng)觀察其形態(tài),用免疫熒光化學(xué)的方法鑒定其表面標(biāo)記抗原,加入成脂成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)其分化,用油紅O和ALP檢測(cè)其分化能力。結(jié)果證實(shí),分離培養(yǎng)出的細(xì)胞是脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。檢測(cè)表明,CD44、CD49、CD105表達(dá)呈陽性；CD34表達(dá)呈陰性；用油紅O和ALP染色后都呈陽性。（2）用5... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
目錄
一、試驗(yàn)研究
    前言
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
            1.1.3 試驗(yàn)儀器與器械
            1.1.4 試驗(yàn)試劑的配制
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 AMSCs的分離
            1.2.2 AMSCs的冷凍
            1.2.3 AMSCs的解凍復(fù)蘇培養(yǎng)
            1.2.4 AMSCs生長(zhǎng)曲線的繪制
            1.2.5 AMSCs的成脂誘導(dǎo)
            1.2.6 AMSCs的成骨誘導(dǎo)
            1.2.7 熒光免疫組化鑒定AMSCs表面標(biāo)記
            1.2.8 血清饑餓培養(yǎng)
            1.2.9 CPA處理細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞周期
            1.2.10 CPA處理后對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)
            1.2.11 Real-time PCR對(duì)周期蛋白基因表達(dá)的分析
            1.2.12 脂肪分化關(guān)鍵基因PPARγ的分析
            1.2.13 成骨分化關(guān)鍵基因Runx的分析
            1.2.14 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果
        2.1 形態(tài)學(xué)觀察
        2.2 生長(zhǎng)曲線
        2.3 成脂誘導(dǎo)
        2.4 成骨誘導(dǎo)
        2.5 熒光免疫組化鑒定AMSCs表面標(biāo)記
        2.6 CPA處理同步化AMSCs對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)程的影響
        2.7 CPA處理對(duì)AMSCs凋亡的影響
        2.8 CPA處理對(duì)周期蛋白cyclinA、cyclinD、cyclinE表達(dá)的影響
            2.8.1 cyclinA、cyclinD、cyclinE的標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.8.2 CPA處理
        2.9 CPA對(duì)AMSCs成脂分化關(guān)鍵基因PPARγ的影響
            2.9.1 PPARγ標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.9.2 脂肪分化關(guān)鍵基因PPARγ的表達(dá)
        2.10 CPA對(duì)AMSCs成骨分化關(guān)鍵基因Runx的影響
            2.10.1 Runx標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.10.2 成骨分化關(guān)鍵基因Runx的表達(dá)
    3 討論
    4 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
二、文獻(xiàn)綜述
    1 Hh信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程
        1.1 Hedgehog蛋白的合成
        1.2 Hedgehog蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)
        1.3 轉(zhuǎn)錄因子的激活
    2 Hh信號(hào)通路的作用
        2.1 對(duì)胚胎發(fā)育的影響
        2.2 Hedgehog蛋白促進(jìn)MSCs的增殖
        2.3 Hedgehog蛋白促進(jìn)MSCs的分化
            2.3.1 成骨分化
            2.3.2 成脂分化
            2.3.3 成肌作用
            2.3.4 在腫瘤及癌癥發(fā)生方面的作用
    3 cyclopamine研究
        3.1 cyclopamine的來源與發(fā)現(xiàn)
        3.2 cyclopamine對(duì)hedgehog信號(hào)通路的作用
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間發(fā)表及待發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3028178