雞傳染性法氏囊�。↖nfectious Bursal Disease，IBD）是由傳染性法氏囊病病毒（Infectious Bursal Disease Virus，IBDV）引起的以侵害雛雞淋巴組織，特別是中樞免疫器官——法氏囊為主要特征的傳染病，每年給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。該病不僅會(huì)造成機(jī)體組織損傷，還會(huì)引起免疫抑制，降低機(jī)體的免疫防御能力，從而導(dǎo)致疫苗免疫接種失敗。近年來，由于各地出現(xiàn)的IBDV變異株和超強(qiáng)毒株，現(xiàn)行疫苗免疫不足以應(yīng)對(duì)這些新出現(xiàn)的挑戰(zhàn)，造成IBD的流行情況呈現(xiàn)更為復(fù)雜的態(tài)勢(shì)，給該病的防控造成較大困難。IBDV的VP2蛋白是該病毒粒子的主要結(jié)構(gòu)蛋白，包含主要保護(hù)性抗原表位，因此VP2蛋白的重組表達(dá)和相關(guān)研究能夠?yàn)镮BDV的防治以及新型亞單位疫苗的開發(fā)提供有益的技術(shù)支撐和理論依據(jù)。本文參照IBDV-VP2標(biāo)準(zhǔn)基因序列，利用Java CodonAdaptation Too（lJCAT）軟件對(duì)IBDV-B87株堿基密碼子進(jìn)行優(yōu)化，合成目的基因，目的基因與pUC-57克隆載體連接為pUC57-VP2，雙酶切pUC57-VP2和pET28a，提取目的基因并將目的基因與pET... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 IBD 臨床癥狀與致病機(jī)理
        1.1.1 臨床癥狀
        1.1.2 IBD 致病機(jī)理
    1.2 IBDV
    1.3 IBDV 基因組結(jié)構(gòu)
    1.4 IBDV 衣殼蛋白
        1.4.1 VP1 蛋白
        1.4.2 VP2 蛋白
        1.4.3 VP3 蛋白
        1.4.4 VP4 蛋白
        1.4.5 VP5 蛋白
    1.5 IBDV 變異分子機(jī)制
    1.6 基因工程重組蛋白表達(dá)
        1.6.1 基因工程菌種
        1.6.2 蛋白表達(dá)質(zhì)粒
        1.6.3 啟動(dòng)子
        1.6.4 融合標(biāo)簽
    1.7 IBD 疫苗研究現(xiàn)狀
        1.7.1 傳統(tǒng) IBD 疫苗
    1.8 基因工程疫苗
        1.8.1 重組亞單位疫苗
        1.8.2 重組活病毒載體疫苗
        1.8.3 DNA 疫苗
    1.9 存在問題及防治前景
    1.10 研究目的與意義
2 雞傳染性法氏囊病病毒 VP2 蛋白原核表達(dá)
    2.1 材料和方法
        2.1.1 質(zhì)粒、菌株
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)所用藥物
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 部分試劑的配制
        2.1.6 目的基因 VP2 的獲得
            2.1.6.1 目的基因序列
            2.1.6.2 目的基因 VP2 的提取
        2.1.7 構(gòu)建重組質(zhì)粒
            2.1.7.1 雙酶切
            2.1.7.2 連接
            2.1.7.3 感受態(tài)細(xì)胞的制備
            2.1.7.4 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
            2.1.7.5 陽性重組質(zhì)粒的篩選與鑒定
            2.1.7.6 陽性重組質(zhì)粒的提取
        2.1.8 重組質(zhì)粒 pET28a-VP2 的原核表達(dá)
        2.1.9 表達(dá)產(chǎn)物的鑒定
            2.1.9.1 SDS-PAGE 檢測(cè)
            2.1.9.2 重組質(zhì)粒的 Western-Blot 鑒定
            2.1.9.3 雞傳染性法氏囊抗體試紙條鑒定 IBDV-VP2 蛋白表達(dá)量
        2.1.10 重組融合蛋白在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化
            2.1.10.1 最佳誘導(dǎo)表達(dá)條件傳染性法氏囊抗體試紙鑒定 IBDV-VP2 蛋白表達(dá)量
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 基因雙酶切鑒定結(jié)果
        2.2.2 重組質(zhì)粒雙酶切鑒定結(jié)果
        2.2.3 重組質(zhì)粒 pET28a-VP2 誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.4 pET28a-VP2 重組蛋白的 Western blot 檢測(cè)結(jié)果
        2.2.5 重組蛋白在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化
        2.2.6 最佳誘導(dǎo)條件下雞傳染性法氏囊抗體試紙條鑒定 IBDV-VP2 蛋白檢測(cè)結(jié)果
    2.3 討論
        2.3.1 表達(dá)系統(tǒng)的選擇
        2.3.2 影響目的蛋白表達(dá)及其活性的因素
        2.3.3 IBDV-VP2 蛋白特征
參考文獻(xiàn)
縮略詞
個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表論文及研究成果
致謝



本文編號(hào)：3028265