豬瘟（Classical swine fever,CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的家豬和野豬的一種傳染病,對養(yǎng)豬業(yè)造成的危害巨大,被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須報告的動物傳病,我國將其列為一類動物疫病。CSFV在感染過程中抑制宿主細(xì)胞的免疫應(yīng)答,從而利于自身的持續(xù)性復(fù)制。深入研究宿主細(xì)胞與CSFV的相互作用及其在CSFV復(fù)制中的作用機制,探索CSFV的免疫逃逸機理,從而為有效控制CSFV復(fù)制提供新的策略。本文主要圍繞與CSFV N^pro相互作用的核糖體蛋白（ribosomal protein S20,uS10）和與CSFV NS3相互作用的腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6（tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6）對CSFV復(fù)制的影響及其作用機制展開了研究,獲得了以下結(jié)果:（1）與CSFV N^pro和NS3蛋白互作的胞內(nèi)蛋白的篩選。通過酵母雙雜交方法在豬肺泡巨噬細(xì)胞（PAM）cDNA文庫中,分別篩選了與CSFV... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

TRAF家族蛋白結(jié)構(gòu)域（引自TizianaZottietal.2017）

包括RelA、RelB、c-Rel、NFκB1（p105/p50）和NFκB2（p100/p52）。有兩條不同的途徑，一條經(jīng)典途徑由細(xì)胞因子TNF-α、IL-1和細(xì)菌成分激活胞因子表達(dá)和抑制凋亡過程中發(fā)揮重要作用。當(dāng)配體刺激時，受體招募接頭MyD88、TRIF及通過連續(xù)的招募觸發(fā)信號級聯(lián)的IRAK家族成員IRAK4及IRF6。TRAF6 RING結(jié)構(gòu)域的泛素連接酶合成賴氨酸63（K63）連接的聚泛素鏈素化TRAF6、TRAF2和NEMO，泛素化的TRAF6激活蛋白激酶TAK1，再依次激IKK）復(fù)合物，包括IKKα、IKKβ和NEMO，然后IKK在特定的絲氨酸殘基α，使其發(fā)生泛素化及蛋白酶介導(dǎo)的降解，最終導(dǎo)致NF-κB的釋放及快速核各種目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄（圖2-2）(Tang et al. 2018)。另有研究報道，在NF-κB激，TRAF6發(fā)生了蛋白酶復(fù)合體介導(dǎo)的降解，提示TRAF6可能通過自身的泛素的降解來調(diào)節(jié)NF-κB通路的激活。另一個非經(jīng)典途徑，由CD40、RANK、誘胞生長因子14（Fn14）或B細(xì)胞激活因子（BAFF）刺激激活，是淋巴器官形，這個途徑包括激活I(lǐng)KKα同源二聚體，然后磷酸化p100的C端結(jié)構(gòu)域，并生成2/RelB復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核并激活靶基因。

pro; B. Autoactivation detection of NS3圖3-2 誘餌蛋白Npro和NS3的自激活檢測Fig.3-2 Autoactivation detection of Nproand NS3 protein3.3.2.2 誘餌蛋白的毒性檢測取 pGBKT7-Npro和 pGBKT7-NS3 及空載體 pGBKT7 的重組菌液在 SD/-Trp 液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，繪制重組菌液的生長曲線，結(jié)果顯示（圖3-3），pGBKT7-Npro和pGBKT7-NS3重組 Y2HGold 菌與及空載體 pGBKT7 的重組菌的生長曲線一致，說明誘餌蛋白 Npro和NS3 對酵母菌的生長基本沒有影響，即 Npro和 NS3 對酵母細(xì)胞沒有毒性。圖3-3 誘餌蛋白Npro和NS3對酵母細(xì)胞的毒性檢測Fig.3-3 Toxicity detection of Nproand NS3 protein on yeast3.3.3 酵母雙雜交陽性克隆的篩選將各Y2HGold酵母重組菌分別與Y187重組菌進(jìn)行雜交，交配前，含有文庫質(zhì)粒的Y187重組菌的滴度為1.2×107cfu/mL，含有誘餌質(zhì)粒pGBKT7-Npro和pGBKT7-NS3的Y2HGold酵母菌與Y187重組菌雜交后的滴度分別是3.9×105cfu/mL和4.5×105cfu/mL。誘

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬瘟活疫苗(傳代細(xì)胞源)對我國不同豬瘟病毒流行毒株的免疫保護(hù)研究[J]. 王琴,范學(xué)政,徐璐,趙啟祖,張乾義,鄒興啟,朱元源,楊勁松,寧宜寶.  中國獸醫(yī)雜志. 2016(12)
[2]2015年我國部分地區(qū)2.1d新基因亞型豬瘟病毒的分子流行病學(xué)分析[J]. 馮麗蘋,張洪亮,劉春曉,冷超糧,陳家锃,李真,彭金美,王倩,白云,張武超,安同慶,蔡雪輝,童光志,田志軍.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2015(09)
[3]我國豬瘟病毒基因流行變異研究[J]. 郝飛,湯德元,曾智勇,李春燕,羅險峰,甘振磊,劉建,王洪光.  中國豬業(yè). 2013(02)
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碩士論文
[1]水泡性口炎病毒G蛋白受體的篩選及初步鑒定[D]. 孫秀萍.吉林大學(xué) 2013



本文編號：3022764