豬乙型腦炎病原為日本腦炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）,屬于黃病毒科（Flaviviridae）黃病毒屬,該屬包括黃熱�。╕ellow fever virus）、日本乙腦病毒（JEV）、西尼羅河病毒（West nile virus）和登革熱病毒（Degue virus）等多種嚴(yán)重危害人畜健康的病毒。目前預(yù)防豬乙型腦炎主要靠接種疫苗和防蚊滅蚊。本研究初步探索了乙型腦炎顆粒疫苗以及新型乙腦病毒滅活劑的效果,HBC是乙型肝炎核心抗原,其在多種表達(dá)體系中均被表達(dá)并能自組裝成病毒樣顆粒,是一種良好的表位展示免疫載體。另外據(jù)報(bào)道作為病毒滅活劑的雙氧水能快速有效滅活病毒,并且對(duì)病毒表面結(jié)構(gòu)的破壞相對(duì)傳統(tǒng)滅活劑-甲醛要小很多,本實(shí)驗(yàn)對(duì)以雙氧水為滅活劑的豬乙型腦炎滅活苗進(jìn)行初步研究。1展示JEV EDIII loop3表位的病毒樣顆粒的制備及其免疫效果研究JEV E蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅲ（EDⅢ）是誘導(dǎo)中和抗體的重要區(qū)域。據(jù)報(bào)道,體外實(shí)驗(yàn)表明EDIII的一個(gè)環(huán)肽（loop3）能通過(guò)干擾病毒吸附細(xì)胞抑制病毒感染,接種該蛋白之后對(duì)小鼠的攻毒實(shí)驗(yàn)表明loop3是保護(hù)性最強(qiáng)的一段... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：91 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)表
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 豬流行性乙型腦炎的研究進(jìn)展
        1 豬流行性乙型腦炎分子生物學(xué)特征
            1.1 病原學(xué)特征
            1.2 流行病學(xué)特征
            1.3 臨床癥狀和病理變化特征
                1.3.1 臨床癥狀
                1.3.2 病理變化
        2 豬流行性乙型腦炎病毒基因組的結(jié)構(gòu)特征
            2.1 結(jié)構(gòu)蛋白
                2.1.1 C蛋白
                2.1.2 prM/M蛋白
                2.1.3 E蛋白
            2.2 非結(jié)構(gòu)蛋白
        3 流行性乙型腦炎病毒的分類和分型
        4 流行性乙型腦炎病毒的毒力和致病機(jī)理
            4.1 流行性乙型腦炎病毒的毒力影響因素
            4.2 流行性乙型腦炎病毒的致病機(jī)理
        5 流行性乙型腦炎病毒的診斷方法
            5.1 臨床診斷
            5.2 病原學(xué)診斷
            5.3 血清學(xué)診斷
                5.3.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）
                5.3.2 免疫熒光檢測(cè)法（IFA法）
                5.3.3 血凝抑制試驗(yàn)
            5.4 分子生物學(xué)檢測(cè)
                5.4.1 逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（RT-PCR）
                5.4.2 基因芯片技術(shù)
                5.4.3 實(shí)時(shí)熒光PCR（Real-Time PCR）
        6 流行性乙型腦炎病毒疫苗的研究進(jìn)展
            6.1 滅活疫苗
            6.2 減毒活疫苗
            6.3 基因工程疫苗
                6.3.1 基因工程亞單位疫苗
                6.3.2 基因工程重組活載體疫苗
                6.3.3 核酸疫苗
                6.3.4 合成肽疫苗
    第二章 HBc顆粒疫苗的研究進(jìn)展
        1 乙肝核心抗原的結(jié)構(gòu)特征
        2 HBcAg的免疫學(xué)優(yōu)勢(shì)
        3 HBeAg顆粒作為免疫載體研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
第二篇 研究?jī)?nèi)容
    第三章 重組原核質(zhì)粒pET28a-HBC-loop3的構(gòu)建及HBC-loop3蛋白的表達(dá)
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 細(xì)菌與載體
            1.2 主要試劑、工具酶及儀器
            1.3 重組原核表達(dá)載體的構(gòu)建
                1.3.1 目的基因的擴(kuò)增
                1.3.2 DNA小量膠回收試劑盒提取凝膠中的DNA
                1.3.3 目的基因連接pMD18-T載體
                1.3.4 陽(yáng)性克隆的篩選
                1.3.5 載體和基因片段的連接反應(yīng)及轉(zhuǎn)化
                1.3.6 陽(yáng)性質(zhì)粒的鑒定
            1.4 轉(zhuǎn)化Rosetta-2大腸桿菌感受態(tài)及陽(yáng)性篩選
            1.5 陽(yáng)性質(zhì)粒的篩選和鑒定
            1.6 蛋白表達(dá)及純化
                1.6.1 IPTG低溫誘導(dǎo)表達(dá)
                1.6.2 超聲波裂解菌體
                1.6.3 表達(dá)產(chǎn)物的可溶性分析
                1.6.4 蛋白純化
                1.6.5 純化重組蛋白HBC-loop3的SDS-聚丙烯酸胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分析
        2 結(jié)果
            2.1 目的基因的擴(kuò)增結(jié)果
            2.2 雙酶切獲得基因片段和載體
            2.3 pET-28a-HBc-loop3陽(yáng)性質(zhì)粒的鑒定
            2.4 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化PCR鑒定
            2.5 表達(dá)產(chǎn)物的分析
            2.6 重組蛋白純化效果SDS-PAGE分析
            2.7 電鏡觀察
            2.8 純化重組蛋白HBC-loop3的Western Blotting分析結(jié)果
        3. 小結(jié)
        Abstract
        參考文獻(xiàn)
    第四章 展示JEV EDIII loop3表位抗原的病毒樣顆粒免疫原性的研究
        摘要
        1 材料
            1.1 蛋白、病毒和細(xì)胞
            1.2 主要試劑和儀器
            1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2 方法
            2.1 動(dòng)物分組及免疫程序
            2.2 檢測(cè)JEV抗體的間接ELISA方法的初步建立
                2.2.1 最適抗原包被濃度和血清稀釋度的確定
                2.2.2 抗原包被最適條件的確定
                2.2.3 最佳封閉條件的確定
                2.2.4 一抗最適工作時(shí)間的選擇
                2.2.5 酶標(biāo)抗體工作時(shí)間的選擇
                2.2.6 底物作用時(shí)間的選擇
                2.2.7 結(jié)果判定臨界值的選擇
                2.2.8 符合性試驗(yàn)
                2.2.9 重復(fù)性試驗(yàn)
            2.3 ELISA法檢測(cè)血清抗體
            2.4 血凝及血凝抑制實(shí)驗(yàn)
                2.4.1 病毒抗原制備
                2.4.2 血清處理
                2.4.3 鵝紅細(xì)胞的制備
                2.4.4 血凝抑制試驗(yàn)
            2.5 蝕斑減少實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血清中和抗體滴度
                2.5.1 蝕斑形成試驗(yàn)
                2.5.2 蝕斑減少中和試驗(yàn)
                2.5.3 結(jié)果判定
        3 結(jié)果
            3.1 顆粒疫苗接種小鼠的健康狀況
            3.2 HBC-loop3顆�？乖庖咝∈笱蹇贵w檢測(cè)（ELISA法）
            3.3 血凝與血凝抑制反應(yīng)測(cè)抗體結(jié)果
            3.4 空斑減少實(shí)驗(yàn)測(cè)血清中和抗體
        4 小結(jié)
        Abstract
        參考文獻(xiàn)
    第五章 過(guò)氧化氫作為日本腦炎滅活苗滅活劑的效果研究
        摘要
        1 材料
            1.1 材料
                1.1.1 病毒和細(xì)胞
                1.1.2 主要試劑和儀器
                1.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2 方法
            2.1 乙腦病毒的純化
                2.1.1 病毒的擴(kuò)增
                2.1.2 蔗糖密度梯度離心純化病毒
            2.2 病毒的滅活及滅活效果的檢測(cè)
            2.3 乙腦滅活苗的制備
            2.4 接種免疫
                2.4.1 首次免疫
                2.4.2 二次免疫
        3 滅活抗原免疫效果評(píng)價(jià)
            3.1 間接ELISA檢測(cè)血清抗體滴度
            3.2 血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)抗體
            3.3 蝕斑減少實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血清中和抗體滴度
        4 結(jié)果
            4.1 乙腦病毒抗原的制備
            4.2 病毒抗原純化的結(jié)果
            4.3 病毒滅活效果的檢測(cè)結(jié)果
            4.4 滅活疫苗接種小鼠的健康狀況
            4.5 雙氧水滅活乙腦抗原ELISA抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果
            4.6 血凝抑制（HI）實(shí)驗(yàn)結(jié)
            4.7 空斑抑制試驗(yàn)驗(yàn)結(jié)果
        5 小結(jié)
        Abstract
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬流行性乙型腦炎病毒種豬精液分離株的鑒定及進(jìn)化分析[J]. 王興濤,羅俊,滕蔓,樊劍鳴,鄂巍,禹斌,劉力,張改平.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(05)
[2]日本乙型腦炎病毒的研究進(jìn)展[J]. 李一生,朱長(zhǎng)清.  飼料博覽. 2011(03)
[3]乙型腦炎病毒（JEV）ELISA檢測(cè)方法的建立[J]. 王吉,衛(wèi)禮,鞏薇,高正琴,岳秉飛,賀爭(zhēng)鳴.  中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志. 2010(08)
[4]檢測(cè)豬乙型腦炎病毒抗體間接ELISA方法的建立與應(yīng)用[J]. 沈婷,周斌,陳溥言.  畜牧與獸醫(yī). 2010(04)
[5]近年來(lái)我國(guó)流行性乙型腦炎研究進(jìn)展[J]. 蔡寶祥.  畜牧與獸醫(yī). 2009(08)
[6]中國(guó)東北地區(qū)3株日本腦炎病毒株的分離鑒定及基因分型[J]. 張永欣,符芳,宋淑萍,李曦,吳東來(lái).  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2009(06)
[7]豬乙型腦炎病毒的研究進(jìn)展[J]. 房獻(xiàn)忠,付強(qiáng),張清華,房杰良.  中國(guó)畜禽種業(yè). 2008(19)
[8]流行性乙型腦炎病毒E蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅲ的抗原表位鑒定與功能研究[J]. 閆麗萍,華榮虹,亓文寶,童光志.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2008(03)
[9]遼寧省乙型腦炎病毒分離及進(jìn)化樹分析[J]. 王作虪,安淑一,王燕,韓悅,郭軍巧.  中國(guó)公共衛(wèi)生. 2008(03)
[10]流行性乙型腦炎病毒及其研究進(jìn)展[J]. 郭楊,郭萬(wàn)柱.  預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志. 2008(01)

碩士論文
[1]日本乙型腦炎實(shí)驗(yàn)室診斷方法的研究和應(yīng)用[D]. 孫圣福.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3011438