試驗(yàn)旨在系統(tǒng)研究貓?jiān)床煌瑏喰蚷mportin （importinα1、importinα3、importinα4、importinα5、importinα6、importinα7、importinα8和importinβ）基因序列和蛋白基本特性,探討其在犬細(xì)小病毒（canine parvovirus,CPV）感染F81細(xì)胞表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。本研究利用RT-PCR方法擴(kuò)增F81細(xì)胞中improtin基因全長序列,應(yīng)用生物學(xué)軟件預(yù)測其氨基酸序列及編碼蛋白的結(jié)構(gòu)及功能;進(jìn)一步利用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測importin基因在CPV感染F81細(xì)胞后24、48和72 h表達(dá)水平。結(jié)果顯示,不同亞型importinα基因全長約在1 500 bp,而importinβ基因全長為2 600 bp;預(yù)測importin亞型蛋白序列發(fā)現(xiàn),其等電點(diǎn)均在4.60左右,且發(fā)現(xiàn)importinα1、importinα5、importinα6、importinα7和importinβ為不穩(wěn)定蛋白;分析發(fā)現(xiàn)這些importin蛋白均無信號肽、無跨膜區(qū)、無細(xì)胞定位;采用Predictprotein軟件預(yù)測蛋白二級... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(12)北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

總RNA電泳圖

以F81細(xì)胞cDNA為模板,PCR擴(kuò)增目的條帶,利用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢驗(yàn)結(jié)果,獲得的importin α亞型基因約1 500 bp和importin β1基因約2 600 bp的目的條帶(圖2),與預(yù)期大小相符。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物純化后連接到pMD18-T克隆載體上,構(gòu)建18-T-importin S(α1、α3、α4、α5、α6、α7、α8和β1)重組質(zhì)粒,挑選陽性克隆質(zhì)粒進(jìn)行測序驗(yàn)證,與原始相似性100%,將重組質(zhì)粒分別命名為18-T-importin S。2.3 貓?jiān)磇mportin不同亞型蛋白理化性質(zhì)

表4 貓?jiān)磇mportin不同亞型蛋白的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測Table 4 Secondary structure prediction for the importin subtypes proteins from cat 蛋白Proteins α-螺旋Alpha-helix 無規(guī)則卷曲Random coil importin α1 67.49 32.51 importin α3 69.18 30.82 importin α4 68.49 31.51 importin α5 70.43 29.57 importin α6 69.51 30.49 importin α7 69.51 30.49 importin α8 69.46 30.54 importin β 75.11 24.893 討 論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]犬細(xì)小病毒昆明流行株的分離鑒定與VP2基因序列分析[J]. 趙屹欽,曾夢穎,郭娟,張迪,高洪,嚴(yán)玉霖.  中國畜牧獸醫(yī). 2019(01)
[2]犬細(xì)小病毒CPV-BJ03/17株分離鑒定及VP2基因遺傳進(jìn)化分析[J]. 王洋,胡博,魯榮光,呂爽,趙輝,廉士珍,閆喜軍.  中國畜牧獸醫(yī). 2018(07)
[3]Importin的結(jié)構(gòu)與功能研究進(jìn)展[J]. 郭建林,徐存拴.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2015(07)



本文編號：3011441