本文關(guān)鍵詞：JARID2在牛早期胚胎發(fā)育過程中的功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：JARID2蛋白是Jumonji去甲基化酶蛋白家族的一員,是早期胚胎發(fā)育的調(diào)節(jié)者,能夠通過組蛋白賴氨酸的修飾作用對小鼠胚胎正常發(fā)育和胚胎干細胞(ESCs)的分化進行調(diào)節(jié)。JARID2能夠通過調(diào)節(jié)早期胚胎發(fā)育中H3K27me3的表達,而H3K27me3的甲基化水平與早期胚胎發(fā)育的正常進行密切相關(guān)。然而,JARID2在牛卵母細胞及早期胚胎發(fā)育階段中的表達規(guī)律及其介導的H3K27me3對牛早期胚胎發(fā)育的影響尚不清楚。為探討JARID2對牛早期胚胎發(fā)育的影響,本研究首先通過實時熒光定量PCR方法和免疫熒光技術(shù),檢測JARID2在牛卵母細胞和早期胚胎各個時期中表達情況。研究結(jié)果表明,JARID2在牛GV期、MII期卵母細胞,體外受精2-細胞期、4-細胞期、8-細胞期、16-細胞期胚胎和桑椹胚、囊胚中均有較高的表達水平,且表達位置主要在細胞核內(nèi),JARID2在牛GV期卵母細胞中相對表達量顯著低于其它各個時期(p0.05)。其次,為明確JARID2介導的H3K27me3對牛早期胚胎發(fā)育的影響,本研究通過顯微注射發(fā)將JARID2-2830-si RNA注入體外受精后的合子中,抑制JARID2的正常表達后檢測合子的卵裂率,結(jié)果顯示:(1)與對照組相比,抑制組H3K27me3的表達顯著降低(P0.05)。(2)抑制組卵裂率、囊胚率與對照組相比分別從62.50%、18.25%下降到27.75%(P0.05)和11.00%(P0.05),表明低表達的JARID2可抑制早期胚胎的發(fā)育。最后,本研究通過熒光定量PCR法檢測顯微注射JARID2-2830-si RNA前后部分胚胎發(fā)育關(guān)鍵基因(OCT4、SOX2和c-myc)的表達變化,初步探討JARID2通過調(diào)控H3K27me3影響胚胎早期發(fā)育的分子通路。結(jié)果顯示,正常情況下OCT4、SOX2和c-myc的m RNA在2-細胞期早期胚胎中表達水平顯著高于囊胚期(P0.05),而顯微注射JARID2-2830-si RNA抑制JARID2的表達后,OCT4、SOX2和c-myc的表達水平均顯著上調(diào)(P0.01),表明JARID2可能通過介導H3K27me3調(diào)控這些基因的表達從而在早期胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮潛在作用。綜上,本研究明確了JARID2在牛卵母細胞及體外受精后牛早期胚胎各個時期的表達規(guī)律及JARID2介導的H3K27me3對牛早期胚胎發(fā)育的影響,并對組蛋白賴氨酸甲基化與去甲基化修飾作用在牛卵母細胞及早期胚胎發(fā)育過程的功能進行了探究,研究結(jié)果為提高胚胎體外培養(yǎng)效率提供了新思路,同時也為深入解析胚胎早期發(fā)育的具體調(diào)控機制提供了理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：組蛋白甲基化酶 組蛋白去甲基化酶 JARID2 卵母細胞 早期胚胎發(fā)育
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S823
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮寫詞表10-11
• 引言11-12
• 第一篇 文獻綜述12-20
• 第一章 胚胎發(fā)育過程中的表觀遺傳修飾12-16
• 1.1 DNA甲基化12-13
• 1.2 組蛋白的化學修飾13-14
• 1.3 DNA甲基化變化及其對早期胚胎發(fā)育的影響14-15
• 1.4 組蛋白甲基化變化及對早期胚胎發(fā)育的影響15-16
• 第二章 JARID2的研究進展16-20
• 2.1 Jumonji蛋白家族16-18
• 2.2 JARID2介導的H3K27甲基化與早期胚胎發(fā)育18-20
• 第二篇 研究內(nèi)容20-46
• 第一章 JARID2在牛卵母細胞與早期胚胎中的表達規(guī)律20-35
• 1.1 實驗材料20-23
• 1.2 實驗方法23-28
• 1.3 結(jié)果28-33
• 1.4 討論33-34
• 1.5 小結(jié)34-35
• 第二章 JARID2介導的H3K27甲基化對牛早期胚胎發(fā)育的影響35-46
• 2.1 實驗材料35
• 2.2 實驗方法35-38
• 2.3 結(jié)果38-43
• 2.4 討論43-45
• 2.5 小結(jié)45-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-54
• 導師簡介54-55
• 作者簡介55-56
• 致謝56

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