本文關(guān)鍵詞：JARID2在牛早期胚胎發(fā)育過程中的功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：JARID2蛋白是Jumonji去甲基化酶蛋白家族的一員,是早期胚胎發(fā)育的調(diào)節(jié)者,能夠通過組蛋白賴氨酸的修飾作用對小鼠胚胎正常發(fā)育和胚胎干細(xì)胞(ESCs)的分化進(jìn)行調(diào)節(jié)。JARID2能夠通過調(diào)節(jié)早期胚胎發(fā)育中H3K27me3的表達(dá),而H3K27me3的甲基化水平與早期胚胎發(fā)育的正常進(jìn)行密切相關(guān)。然而,JARID2在牛卵母細(xì)胞及早期胚胎發(fā)育階段中的表達(dá)規(guī)律及其介導(dǎo)的H3K27me3對牛早期胚胎發(fā)育的影響尚不清楚。為探討JARID2對牛早期胚胎發(fā)育的影響,本研究首先通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法和免疫熒光技術(shù),檢測JARID2在牛卵母細(xì)胞和早期胚胎各個(gè)時(shí)期中表達(dá)情況。研究結(jié)果表明,JARID2在牛GV期、MII期卵母細(xì)胞,體外受精2-細(xì)胞期、4-細(xì)胞期、8-細(xì)胞期、16-細(xì)胞期胚胎和桑椹胚、囊胚中均有較高的表達(dá)水平,且表達(dá)位置主要在細(xì)胞核內(nèi),JARID2在牛GV期卵母細(xì)胞中相對表達(dá)量顯著低于其它各個(gè)時(shí)期(p0.05)。其次,為明確JARID2介導(dǎo)的H3K27me3對牛早期胚胎發(fā)育的影響,本研究通過顯微注射發(fā)將JARID2-2830-si RNA注入體外受精后的合子中,抑制JARID2的正常表達(dá)后檢測合子的卵裂率,結(jié)果顯示:(1)與對照組相比,抑制組H3K27me3的表達(dá)顯著降低(P0.05)。(2)抑制組卵裂率、囊胚率與對照組相比分別從62.50%、18.25%下降到27.75%(P0.05)和11.00%(P0.05),表明低表達(dá)的JARID2可抑制早期胚胎的發(fā)育。最后,本研究通過熒光定量PCR法檢測顯微注射JARID2-2830-si RNA前后部分胚胎發(fā)育關(guān)鍵基因(OCT4、SOX2和c-myc)的表達(dá)變化,初步探討JARID2通過調(diào)控H3K27me3影響胚胎早期發(fā)育的分子通路。結(jié)果顯示,正常情況下OCT4、SOX2和c-myc的m RNA在2-細(xì)胞期早期胚胎中表達(dá)水平顯著高于囊胚期(P0.05),而顯微注射JARID2-2830-si RNA抑制JARID2的表達(dá)后,OCT4、SOX2和c-myc的表達(dá)水平均顯著上調(diào)(P0.01),表明JARID2可能通過介導(dǎo)H3K27me3調(diào)控這些基因的表達(dá)從而在早期胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮潛在作用。綜上,本研究明確了JARID2在牛卵母細(xì)胞及體外受精后牛早期胚胎各個(gè)時(shí)期的表達(dá)規(guī)律及JARID2介導(dǎo)的H3K27me3對牛早期胚胎發(fā)育的影響,并對組蛋白賴氨酸甲基化與去甲基化修飾作用在牛卵母細(xì)胞及早期胚胎發(fā)育過程的功能進(jìn)行了探究,研究結(jié)果為提高胚胎體外培養(yǎng)效率提供了新思路,同時(shí)也為深入解析胚胎早期發(fā)育的具體調(diào)控機(jī)制提供了理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：組蛋白甲基化酶 組蛋白去甲基化酶 JARID2 卵母細(xì)胞 早期胚胎發(fā)育
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S823
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮寫詞表10-11
• 引言11-12
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述12-20
• 第一章 胚胎發(fā)育過程中的表觀遺傳修飾12-16
• 1.1 DNA甲基化12-13
• 1.2 組蛋白的化學(xué)修飾13-14
• 1.3 DNA甲基化變化及其對早期胚胎發(fā)育的影響14-15
• 1.4 組蛋白甲基化變化及對早期胚胎發(fā)育的影響15-16
• 第二章 JARID2的研究進(jìn)展16-20
• 2.1 Jumonji蛋白家族16-18
• 2.2 JARID2介導(dǎo)的H3K27甲基化與早期胚胎發(fā)育18-20
• 第二篇 研究內(nèi)容20-46
• 第一章 JARID2在牛卵母細(xì)胞與早期胚胎中的表達(dá)規(guī)律20-35
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料20-23
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法23-28
• 1.3 結(jié)果28-33
• 1.4 討論33-34
• 1.5 小結(jié)34-35
• 第二章 JARID2介導(dǎo)的H3K27甲基化對牛早期胚胎發(fā)育的影響35-46
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料35
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法35-38
• 2.3 結(jié)果38-43
• 2.4 討論43-45
• 2.5 小結(jié)45-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-54
• 導(dǎo)師簡介54-55
• 作者簡介55-56
• 致謝56

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