為了建立特異性好和敏感性高的綿羊肺支原體抗體ELISA檢測方法,以綿羊肺炎支原體Y98標準菌株的全菌蛋白作為抗原,進行了反應(yīng)體系和反應(yīng)條件的優(yōu)化篩選。結(jié)果顯示:最佳蛋白抗原包被濃度為1.52μg/mL,最適封閉液及其稀釋濃度為1%BSA,血清樣品的稀釋度為1/50,兔抗山羊IgG的最適稀釋濃度為1/4 000,一抗和二抗的最佳作用時間為37℃60 min,底物顯色的最佳時間為10 min;通過與綿羊肺炎支原體抗體間接血凝試驗（IHA）檢測結(jié)果相比,60份羊血清樣品中Y98 ELISA檢出陽性為33份,陰性為20份,二者的檢測符合率可達到88.33%,相對特異性達90.90%。提示:建立的綿羊肺炎支原體血清抗體檢測方法具有較高的檢測敏感性和特異性,為綿羊肺炎支原體的抗體檢測及其感染的流行病學(xué)調(diào)查提供了一種快速簡便的檢測工具。 

【文章來源】：畜牧與獸醫(yī). 2020,52(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

血清最佳反應(yīng)時間的優(yōu)化

二抗最佳稀釋濃度(a)和最佳作用時間(b)的優(yōu)化

封閉液的篩選優(yōu)化

【參考文獻】：
期刊論文
[1]綿羊肺炎支原體和絲狀支原體山羊亞種雙重TaqMan探針熒光定量PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J]. 林裕勝,李莎莎,江錦秀,張靖鵬,游偉,胡奇林.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2019(05)
[2]綿羊肺炎支原體TaqMan實時熒光定量PCR檢測方法的建立與應(yīng)用[J]. 韓瑞鑫,申捷,申之義.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2018(08)
[3]寧夏不同綿羊品種中綿羊肺炎支原體的調(diào)查[J]. 謝秀蘭,額爾和花,黎帥,馬小明,黎玉瓊,李穎康.  中國獸醫(yī)雜志. 2017(06)
[4]綿羊支原體性肺炎防治措施[J]. 王興和.  中國動物保健. 2016(10)
[5]綿羊肺炎支原體固相競爭ELISA抗體檢測方法的建立[J]. 宋蓉.  農(nóng)民致富之友. 2015(20)
[6]綿羊肺炎支原體間接ELISA檢測方法的建立及應(yīng)用[J]. 趙萍,儲岳峰,高鵬程,賀英,趙海燕,逯忠新.  福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2008(05)
[7]綿羊肺炎支原體間接血凝診斷方法的建立[J]. 趙萍,逯忠新,儲岳峰,高鵬程,賀英,石琴.  甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2008(01)
[8]綿羊肺炎支原體的微生物學(xué)特性的研究[J]. 張莉,王作艷,孫繼國,林密,薛擁志.  河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2003(S1)

博士論文
[1]綿羊肺炎支原體檢測方法的建立及黏附蛋白的研究[D]. 黃海碧.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016

碩士論文
[1]豬流感病毒（H3N2）NP蛋白納米抗體的制備及阻斷ELISA方法的建立與評價[D]. 朱光.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2019
[2]綿羊肺炎支原體生物學(xué)特性及其PCR快速檢測技術(shù)的研究[D]. 張莉.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003



本文編號：2996475