副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）可引起豬漿液纖維素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、關(guān)節(jié)炎及腦膜腦炎等癥狀。副豬嗜血桿菌病在全世界范圍內(nèi)廣泛流行，成為威脅養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病之一。本試驗(yàn)在2011年12月-2013年2月期間，對江西省多個(gè)地區(qū)的疑似病料進(jìn)行HPS的分離鑒定及血清分型，從中選擇代表菌株進(jìn)行抑制性差減雜交來篩選差異基因，并進(jìn)行分布調(diào)查，最后根據(jù)調(diào)查結(jié)果建立二重PCR用于臨床上該菌的鑒定與毒力檢測，具體如下：1、副豬嗜血桿菌的分離鑒定及血清分型在2011年12月-2013年2月期間，從江西多個(gè)地區(qū)的疑似病料中共分離鑒定出了39株HPS，這些菌株主要分離自肺臟（51.28%）、心臟（30.77%）、關(guān)節(jié)液（15.38%）和肝臟（2.56%）。將各分離株通過傳統(tǒng)的Kielstein-Rapp-Gabrielson（KRG）分型方法進(jìn)行血清分型，結(jié)果表明江西省HPS流行的血清型為5型（25.64%），13型（20.51%），4型（10.26%），12型（5.13%），15型（5.13%）。2、副豬嗜血桿菌潛在毒力基因的篩選采用抑制性差減雜交技術(shù)分別篩選高毒力13... 

【文章來源】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 副豬嗜血桿菌的研究進(jìn)展
        1.1 副豬嗜血桿菌的生物學(xué)特性
        1.2 副豬嗜血桿菌病的研究現(xiàn)狀
            1.2.1 副豬嗜血桿菌病流行病學(xué)
            1.2.2 副豬嗜血桿菌病的發(fā)病機(jī)理
            1.2.3 副豬嗜血桿菌病的臨床癥狀
            1.2.4 副豬嗜血桿菌病的病理變化
            1.2.5 副豬嗜血桿菌病的診治
        1.3 血清型研究
            1.3.1 血清分型
            1.3.2 血清型與毒力之間的關(guān)系
        1.4 毒力因子
            1.4.1 菌毛
            1.4.2 莢膜
            1.4.3 脂多糖
            1.4.4 外膜蛋白
            1.4.5 神經(jīng)氨酸酶
            1.4.6 轉(zhuǎn)鐵蛋白
            1.4.7 毒力相關(guān)三聚自轉(zhuǎn)運(yùn)載體
            1.4.8 其他毒力因子相關(guān)研究
    2 抑制性差減雜交技術(shù)
        2.1 抑制性差減雜交技術(shù)原理
        2.2 抑制性差減雜交技術(shù)流程
            2.2.1 基因組的酶切
            2.2.2 接頭的連接
            2.2.3 兩輪差減雜交
            2.2.4 兩次抑制性 PCR 反應(yīng)
        2.3 抑制性差減雜交技術(shù)注意事項(xiàng)
        2.4 抑制性差減雜交技術(shù)在細(xì)菌毒力研究中的應(yīng)用
            2.4.1 毒力島或遺傳島的發(fā)現(xiàn)
            2.4.2 毒力基因的篩選
            2.4.4 基因表達(dá)上的變化
第二章 江西省副豬嗜血桿菌的分離鑒定及血清分型
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 病料及血清來源
            1.1.2 主要試劑
        1.2 方法
            1.2.1 副豬嗜血桿菌的分離鑒定
            1.2.2 副豬嗜血桿菌的血清分型
    2 結(jié)果
        2.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng)
        2.2 生化試驗(yàn)
        2.3 PCR 鑒定
        2.4 江西分離株概況
        2.5 血清分型結(jié)果
    3 討論
第三章 副豬嗜血桿菌潛在毒力基因的篩選
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌株、載體和質(zhì)粒
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 培養(yǎng)基
            1.1.4 Southern blot 緩沖液的配制
            1.1.5 試驗(yàn)用引物
        1.2 方法
            1.2.1 試驗(yàn)菌株基因組的提取
            1.2.2 基因組的酶切
            1.2.3 抑制性差減雜交
            1.2.4 差減文庫的構(gòu)建
            1.2.5 斑點(diǎn)雜交試驗(yàn)對差異基因的篩選
            1.2.6 差異基因的測序、對比、分析
    2 結(jié)果
        2.1 基因組的提取
        2.2 酶切基因組
        2.3 接頭的連接
        2.4 抑制性差減雜交
        2.5 差減效率檢測
        2.6 差減文庫構(gòu)建
        2.7 斑點(diǎn)雜交試驗(yàn)
            2.7.1 JX1108 和 HS197 斑點(diǎn)雜交結(jié)果
            2.7.2 HPJX9 和 HS81 斑點(diǎn)雜交結(jié)果
        2.8 篩選的差異片段的測序及分析
            2.8.1 JX1108 和 HS197 差異片段的測序及分析
            2.8.2 HPJX9 和 HS81 差異片段的測序及分析
    3 討論
第四章 副豬嗜血桿菌潛在毒力基因的分布調(diào)查
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌株
            1.1.2 培養(yǎng)基
            1.1.3 試劑
            1.1.4 引物
        1.2 方法
            1.2.1 模板的制備
            1.2.2 潛在毒力基因在參考菌株中分布調(diào)查
            1.2.3 毒力偏向性基因在江西地方分離株中的分布調(diào)查
    2 結(jié)果
        2.1 潛在毒力基因在參考菌株中的分布
            2.1.1 JX1108 與 HS197 的潛在毒力基因在參考菌株中的分布
            2.1.2 HPJX9 與 HS81 的潛在毒力基因在參考菌株中的分布
        2.2 毒力偏向性基因在江西地方分離株中的分布
            2.2.1 JX1108 與 HS197 篩選的毒力偏向性基因在江西地方分離株中的分布
            2.2.2 HPJX9 與 HS81 篩選的毒力偏向性基因在江西地方分離株中的分布
    3 討論
第五章 鑒別副豬嗜血桿菌潛在毒株的二重 PCR 方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌種
            1.1.2 主要試劑
        1.2 方法
            1.2.1 引物設(shè)計(jì)
            1.2.2 基因組 DNA 的提取
            1.2.3 引物特異性試驗(yàn)
            1.2.4 引物對參考株的檢測
            1.2.5 二重 PCR 條件的優(yōu)化
            1.2.6 二重 PCR 特異性試驗(yàn)
            1.2.7 二重 PCR 敏感性試驗(yàn)
            1.2.8 二重 PCR 對參考株的檢測
            1.2.9 二重 PCR 的初步應(yīng)用
    2 結(jié)果
        2.1 引物特異性
        2.2 引物對參考株的檢測
        2.3 二重 PCR 條件的優(yōu)化
        2.4 二重 PCR 的特異性
        2.5 二重 PCR 的敏感性
        2.6 二重 PCR 對參考株的檢測
        2.7 二重 PCR 的初步應(yīng)用
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：2994166