發(fā)布時(shí)間：2021-01-23 01:13

　　乙型腦炎病毒（JEV）屬于黃病毒科黃病毒屬的成員,是一種危害嚴(yán)重的人畜共患病病原。該病毒嚴(yán)重危害人類(lèi)健康,感染人后入侵中樞神經(jīng)系統(tǒng),造成死亡或者是留下嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。同時(shí)它可以感染豬群,造成種豬繁殖障礙,最終導(dǎo)致養(yǎng)豬業(yè)的巨大經(jīng)濟(jì)損失。miRNA是基因在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控的一種重要方式,在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、細(xì)胞凋亡及代謝等生命過(guò)程中都起著重要作用。miRNA在病毒感染入侵及宿主細(xì)胞的抗病毒等方面也發(fā)揮著調(diào)節(jié)作用。而目前對(duì)于JEV誘導(dǎo)細(xì)胞niRNA表達(dá)譜的研究暫無(wú)報(bào)道,相關(guān)研究對(duì)于深入認(rèn)識(shí)JEV的致病機(jī)制十分重要。本研究具體內(nèi)容如下：將JEVP3和SA14-14-2毒株分別感染U251細(xì)胞后,提取總RNA,通過(guò)solexa測(cè)序技術(shù),鑒定出JEV誘導(dǎo)U251的miRNA表達(dá)譜的變化情況,發(fā)現(xiàn)了其表達(dá)譜的基本特征。與對(duì)照組相比,有161個(gè)miRNA在JEV P3感染時(shí)發(fā)生了改變,175個(gè)miRNA在JEV SA14-14-2感染時(shí)發(fā)生了改變。而與SA14-14-2感染相比,P3感染誘導(dǎo)了76個(gè)miRNA的改變,其中60個(gè)miRNA表達(dá)上調(diào),16個(gè)miRNA表達(dá)下調(diào)。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)部分... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表（Abbreviation）
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 乙型腦炎病毒簡(jiǎn)介
        1.1.1 引言
        1.1.2 乙型腦炎的流行病學(xué)
        1.1.3 JEV的病原學(xué)特征
        1.1.4 病毒的基因結(jié)構(gòu)和功能
        1.1.5 病毒的理化特性
        1.1.6 病毒復(fù)制
        1.1.7 致病機(jī)理
    1.2 miRNA研究進(jìn)展
        1.2.1 miRNA的產(chǎn)生
        1.2.2 miRNA的作用方式
        1.2.3 miRNA與病毒
        1.2.4 病毒編碼的miRNA
        1.2.5 miRNA的研究方法
2 研究目的與意義
3 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 毒株、菌株及細(xì)胞系
        3.1.2 質(zhì)粒
        3.1.3 主要藥品及試劑
        3.1.4 主要培養(yǎng)基及其配制
        3.1.5 主要緩沖液（溶液）及其配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 病毒感染
        3.2.2 細(xì)胞總RNA的提取
        3.2.3 RNA質(zhì)量鑒定
        3.2.4 solexa高通量測(cè)序
        3.2.5 小RNA的生物信息學(xué)分析
        3.2.6 miRNA的驗(yàn)證
        3.2.7 靶基因的獲得
        3.2.8 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.9 突變體報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.10 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
        3.2.11 miRNA轉(zhuǎn)染
        3.2.12 病毒基因的qPCR檢測(cè)
        3.2.13 Western blot檢測(cè)
        3.2.14 空斑實(shí)驗(yàn)
        3.2.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
4 結(jié)果與分析
    4.1 RNA樣品的準(zhǔn)備
    4.2 深度測(cè)序結(jié)果
        4.2.1 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        4.2.2 sRNA的長(zhǎng)度分布及首位堿基偏向性
        4.2.3 差異表達(dá)的miRNA
    4.3 miRNA的qPCR驗(yàn)證
    4.4 miRNA與病毒的互作
        4.4.1 靶向JEV基因組的miRNA的預(yù)測(cè)
        4.4.2 miRNA靶標(biāo)的構(gòu)建
        4.4.3 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
        4.4.4 miR-487b作用位點(diǎn)的確定
        4.4.5 miR-487b下調(diào)病毒RNA水平
        4.4.6 miR-487b抑制病毒蛋白表達(dá)
        4.4.7 miR-487b降低病毒滴度
5 討論
    5.1 侵染細(xì)胞和研究方法的選擇
    5.2 miRNA對(duì)天然免疫的調(diào)節(jié)
    5.3 JEV編碼的miRNA
    5.4 miRNA對(duì)病毒的抑制作用
    5.5 miRNA應(yīng)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄



本文編號(hào)：2994249