發(fā)布時間：2021-01-23 01:13

　　乙型腦炎病毒（JEV）屬于黃病毒科黃病毒屬的成員,是一種危害嚴重的人畜共患病病原。該病毒嚴重危害人類健康,感染人后入侵中樞神經(jīng)系統(tǒng),造成死亡或者是留下嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。同時它可以感染豬群,造成種豬繁殖障礙,最終導致養(yǎng)豬業(yè)的巨大經(jīng)濟損失。miRNA是基因在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控的一種重要方式,在細胞生長、分化、細胞凋亡及代謝等生命過程中都起著重要作用。miRNA在病毒感染入侵及宿主細胞的抗病毒等方面也發(fā)揮著調(diào)節(jié)作用。而目前對于JEV誘導細胞niRNA表達譜的研究暫無報道,相關(guān)研究對于深入認識JEV的致病機制十分重要。本研究具體內(nèi)容如下：將JEVP3和SA14-14-2毒株分別感染U251細胞后,提取總RNA,通過solexa測序技術(shù),鑒定出JEV誘導U251的miRNA表達譜的變化情況,發(fā)現(xiàn)了其表達譜的基本特征。與對照組相比,有161個miRNA在JEV P3感染時發(fā)生了改變,175個miRNA在JEV SA14-14-2感染時發(fā)生了改變。而與SA14-14-2感染相比,P3感染誘導了76個miRNA的改變,其中60個miRNA表達上調(diào),16個miRNA表達下調(diào)。通過實時熒光定量PCR對部分... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表（Abbreviation）
1 文獻綜述
    1.1 乙型腦炎病毒簡介
        1.1.1 引言
        1.1.2 乙型腦炎的流行病學
        1.1.3 JEV的病原學特征
        1.1.4 病毒的基因結(jié)構(gòu)和功能
        1.1.5 病毒的理化特性
        1.1.6 病毒復制
        1.1.7 致病機理
    1.2 miRNA研究進展
        1.2.1 miRNA的產(chǎn)生
        1.2.2 miRNA的作用方式
        1.2.3 miRNA與病毒
        1.2.4 病毒編碼的miRNA
        1.2.5 miRNA的研究方法
2 研究目的與意義
3 材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 毒株、菌株及細胞系
        3.1.2 質(zhì)粒
        3.1.3 主要藥品及試劑
        3.1.4 主要培養(yǎng)基及其配制
        3.1.5 主要緩沖液（溶液）及其配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 病毒感染
        3.2.2 細胞總RNA的提取
        3.2.3 RNA質(zhì)量鑒定
        3.2.4 solexa高通量測序
        3.2.5 小RNA的生物信息學分析
        3.2.6 miRNA的驗證
        3.2.7 靶基因的獲得
        3.2.8 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.9 突變體報告質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.10 雙熒光素酶報告實驗
        3.2.11 miRNA轉(zhuǎn)染
        3.2.12 病毒基因的qPCR檢測
        3.2.13 Western blot檢測
        3.2.14 空斑實驗
        3.2.15 統(tǒng)計學方法
4 結(jié)果與分析
    4.1 RNA樣品的準備
    4.2 深度測序結(jié)果
        4.2.1 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        4.2.2 sRNA的長度分布及首位堿基偏向性
        4.2.3 差異表達的miRNA
    4.3 miRNA的qPCR驗證
    4.4 miRNA與病毒的互作
        4.4.1 靶向JEV基因組的miRNA的預(yù)測
        4.4.2 miRNA靶標的構(gòu)建
        4.4.3 雙熒光素酶報告基因檢測
        4.4.4 miR-487b作用位點的確定
        4.4.5 miR-487b下調(diào)病毒RNA水平
        4.4.6 miR-487b抑制病毒蛋白表達
        4.4.7 miR-487b降低病毒滴度
5 討論
    5.1 侵染細胞和研究方法的選擇
    5.2 miRNA對天然免疫的調(diào)節(jié)
    5.3 JEV編碼的miRNA
    5.4 miRNA對病毒的抑制作用
    5.5 miRNA應(yīng)用于動物實驗
6 結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄



本文編號：2994249