乙型腦炎（Japanese encephalitis, JE）是由日本乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）引起的一種人畜共患病,患者多表現(xiàn)為發(fā)熱、腹瀉、頭痛、惡心、意識水平下降、顫抖以及行動異常等,而豬群受感染后表現(xiàn)為明顯生殖障礙。靶向中樞神經(jīng)系統(tǒng),引發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng),是乙型腦炎病毒導(dǎo)致人和動物發(fā)病、、死亡的主要因素。而小膠質(zhì)細(xì)胞過度激活及其誘導(dǎo)的大量炎癥因子分泌,則是JEV引發(fā)腦部炎癥反應(yīng)的重要途徑。但JEV通過何種信號通路激活小膠質(zhì)細(xì)胞,其分子機制如何等科學(xué)問題仍不清楚。本研究首先從TLR3和RIG-Ⅰ信號通路入手,研究了JEV感染小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞之后炎癥因子的表達(dá)、信號通路的激活情況。具體研究內(nèi)容如下：以小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2為體外模型,研究了乙型腦炎病毒在該細(xì)胞中的增殖情況,發(fā)現(xiàn)該病毒可以感染BV-2,但在該細(xì)胞中的增殖滴度較低,熒光定量檢測C基因拷貝數(shù)在48h內(nèi)增加不超過10倍。經(jīng)熒光定量PCR與ELISA方法檢測,乙型腦炎病毒感染能有效刺激細(xì)胞因子、趨化因子如TNF-α、IL-6、CCL-2表達(dá)量顯著上調(diào)；同時,Wester... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表（Abbreviation）
文獻綜述
    1.1 乙型腦炎的流行病學(xué)
        1.1.1 乙型腦炎的流行與分布
        1.1.2 乙型腦炎的危害及易感群體
        1.1.3 乙型腦炎的傳播
    1.2 乙型腦炎的病原學(xué)
        1.2.1 乙型腦炎的形態(tài)結(jié)構(gòu)
        1.2.2 乙型腦炎病毒的理化特性
        1.2.3 乙型腦炎病毒的復(fù)制
    1.3 乙型腦炎病毒的致病機理
        1.3.1 病毒血癥與血腦屏障
        1.3.2 細(xì)胞因子與信號通路
    1.4 乙型腦炎的臨床表現(xiàn)
    1.5 乙型腦炎的檢測診斷
    1.6 乙型腦炎的防治
    1.7 研究目的與意義
2. 實驗材料、方法與結(jié)果分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 所用的寡核苷酸引物
        2.1.2 質(zhì)粒、毒株、細(xì)胞與實驗動物
        2.1.3 主要藥品及試劑
        2.1.4 主要培養(yǎng)基及其配制
        2.1.5 主要緩沖液（溶液）及其配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 引物設(shè)計
        2.2.2 病毒滴度測定
        2.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)、動物飼養(yǎng)及接毒
        2.2.4 間接免疫熒光
        2.2.5 細(xì)胞、組織樣品處理
        2.2.6 RNA提取與濃度測定
        2.2.7 RNA處理與反轉(zhuǎn)錄（RT-PCR）
        2.2.8 轉(zhuǎn)錄水平細(xì)胞因子表達(dá)差異分析
        2.2.9 細(xì)胞內(nèi)JEV增殖情況分析
        2.2.10 TLR3與RIG-I干擾（shRNA轉(zhuǎn)染）
        2.2.11 Western Blot
        2.2.12 蛋白水平細(xì)胞因子表達(dá)差異分析
        2.2.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 病毒增殖情況分析
        2.3.2 間接免疫熒光檢測
        2.3.3 細(xì)胞因子表達(dá)分析
        2.3.4 小鼠腦組織中細(xì)胞因子表達(dá)分析
        2.3.5 TLR3、RIG-I蛋白表達(dá)分析
        2.3.6 ERK、p38MAPK磷酸化蛋白表達(dá)分析
        2.3.7 NF-κB、AP-1入核表達(dá)分析
        2.3.8 shRNA轉(zhuǎn)染與干擾效果測定
        2.3.9 干擾后ERK、p38MAPK磷酸化蛋白表達(dá)分析
        2.3.10 干擾后轉(zhuǎn)錄因子入核表達(dá)分析
        2.3.11 干擾后細(xì)胞因子表達(dá)分析
        2.3.12 ERK、p38MAPK抑制劑作用后細(xì)胞因子表達(dá)分析
        2.3.13 干擾后JEV病毒增殖情況分析
3. 討論
    3.1 JEV上調(diào)BV-2細(xì)胞炎癥因子及TLR3、RIG-I蛋白表達(dá)
    3.2 JEV上調(diào)BV-2細(xì)胞信號通路激酶磷酸化與轉(zhuǎn)錄因子入核轉(zhuǎn)錄
    3.3 TLR3、RIG-I與乙型腦炎的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)
    3.4 JEV在BV-2中的增殖及其對TLR3與RIG-I的依賴性
    3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
發(fā)表論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]豬乙型腦炎病的診斷與防制[J]. 胡仲達(dá).  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2010(01)
[2]豬流行性乙型腦炎及防治[J]. 林太明,李圣元.  畜禽業(yè). 2008(09)
[3]豬日本腦炎的防治[J]. 何啟蓋,徐高原.  豬業(yè)科學(xué). 2008(06)

博士論文
[1]乙型腦炎病毒與樹突狀細(xì)胞的互作研究[D]. 李么明.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[2]豬源乙型腦炎病毒SXBJ07株全長基因組克隆分析及ELISA檢測方法的建立[D]. 王（韋華）.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2009

碩士論文
[1]乙型腦炎病毒雙抗體夾心ELISA抗原檢測方法的建立與應(yīng)用[D]. 梅力.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號：2989728