脂肪組織是禽類脂質(zhì)沉積的主要部位,在穩(wěn)定機體代謝平衡中發(fā)揮重要作用。前脂肪細胞是一類具有增殖和定向分化為脂肪細胞的前體細胞,目前關(guān)于水禽前脂肪細胞的體外培養(yǎng)及其分化調(diào)控還缺乏系統(tǒng)的認識。本研究以北京鴨為試驗材料,首次分離培養(yǎng)鴨前脂肪細胞,摸索最佳誘導(dǎo)方式,建立一個體外誘導(dǎo)細胞分化的模型；其次,利用體外分離培養(yǎng)前脂肪細胞的模型,分別研究了羅格列酮（RSG）、胰島素和地塞米松（DEX）三種因素對鴨前脂肪細胞分化的調(diào)控機理。最后,克隆脂肪分化關(guān)鍵基因FAS和SCD1,檢測其發(fā)育性表達模式,初步探討二者在脂肪分化過程中的作用。本研究取得的主要結(jié)果和結(jié)論如下：（1）以一周齡農(nóng)華肉鴨皮下脂肪組織為材料,用膠原酶消化法可以分離培養(yǎng)出較多的成分均一原代前脂肪細胞。鴨前脂肪細胞在接種后的第三天開始迅速增殖,第七天后細胞生長進入平臺期。在胰島素,DEX,IBMX和油酸的共同誘導(dǎo)下,梭形的前脂肪細胞,經(jīng)過8天的誘導(dǎo),大多數(shù)細胞分化為圓形的成熟脂肪細胞。此時細胞內(nèi)沉積大脂滴,油紅O染色為紅色證實細胞已分化成熟。鴨前脂肪細胞分化過程中,C/EBPα表達量呈上升趨勢,并在分化第五天達到峰值,然后再降低；PPARγ... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１脂肋分化的轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)??Ｆｉｇ．?１－１?Ａ?ｃｏｍｐｌｅｘ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ?ｃａｓｃａｄｅ?ｉ＊ｅｇｕｌａｔｅｓ?ａ出ｐｏ呂ｅｎｅｓｉｓ??（ａ）兩?

圖１－２細胞外因素對脂肋分化的調(diào)控??Ｆｉｇ．?１－２?Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｄｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ?ｂｙ?ｅｘｔｒａｃｅｌ山ｌａｒ?ｆａｒｔｏｒｓ??５參與脂肋細胞分化的重要基因??５．１?ＦＡＳ??脂肪酸合酶（ｆａｔｔｙ?ａｃｉｄ?ｓｙｎｔｈａｓｅ，?ＦＡＳ）是脂肪從頭合成途徑的關(guān)鍵酶，可Ｗ利用糖??代謝產(chǎn)生的乙酷輔酶Ａ和丙二酸單瞞輔酶Ａ催化合成飽和脂肪酸，其主要產(chǎn)物是１６個Ｃ的??棟楠酸份包含兩個亞基，每個亞基含有７個不同功能的結(jié)構(gòu)域，反別是；??Ｐ－ｋｅｔｏａｃｙｌ?ｓｙｎｔｈａｓｅ?（ＫＳ）、ｍａｌｏｎｙｌ／ａｃｅｔｙｌ?ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ?（ＭＡＴ）、ｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅ?（ＤＨ）、ｅｎｏｙｌ??ｒｅｄｕｃｔａｓｅ?（ＥＲ）、Ｐ－ｋｅｔｏａｃｙｌ?ｒ＊ｅｄｕｃｔａｓｅ?（ＫＲ）、ａｃｙｌ?ｃａｒｒｉｅｒ?ｐｒｏｔ；ｅｉｎ?（ＡＣＰ））臥及ｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅ??（ＴＥ），其中ＴＥ結(jié)構(gòu)域?qū)Γ疲粒踊虻墓δ芷痍P(guān)鍵作用ｔｉＭ’ｉＷ。作為脂肪合成的關(guān)鍵酶，??ＦＡＳ在脂肪生成的組織高度表達，如肝臟和脂肪組織，也能在哺乳期的乳腺組織中有表??達ＵＭｌ。Ｅ４Ｓ基因ｍＲＮＡ表達水平的高低通常作為衡量組織或者細胞中脂肪酸合成能力的??指標在咕齒類和哺乳動物，似Ｓ的表達水平與機體脂肪含量呈正相關(guān)脂??

?‘??３．?２巧前脂肪細胞生長曲線繪制??圖２－２反映了體外培養(yǎng)的鴨原代前脂肪細胞的生長曲線。如圖２－２所示，在前Ｈ天，??鴨前脂肪細胞的生長處于潛伏期，此階段細胞生長緩慢。從第四天開始，直到第４：天，??細胞増殖迅速，細胞活性雖著増強，此階段為細胞增殖的對數(shù)期。從第八天開始，細胞??生長進入平臺期，此階段細胞活性漸漸趨于穩(wěn)定。培養(yǎng)第九天之后，細胞活性開始下降。??２９??


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