試驗(yàn)通過(guò)乳腺基部注射金黃色葡萄球菌懸液感染小鼠乳腺誘發(fā)乳腺炎，并用金銀花和/或連翹三種清熱解毒藥對(duì)金黃色葡萄球菌誘發(fā)的小鼠乳腺炎進(jìn)行預(yù)防和治療，同時(shí)分別用EGFP標(biāo)記E.coli BL21菌株和奶牛乳房炎源金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株黏附奶牛乳腺上皮細(xì)胞制作細(xì)菌黏附細(xì)胞模型，共同探討金黃色葡萄球菌感染乳腺的致病機(jī)理，以及金銀花、連翹防治乳腺炎的作用機(jī)理、清熱解毒藥抗金黃色葡萄球菌黏附乳腺上皮細(xì)胞作用機(jī)理。采用組織塊接種法結(jié)合胰酶消化體外分離培養(yǎng)荷斯坦奶牛乳腺上皮細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)孔底80%左右時(shí)，用胰酶經(jīng)過(guò)2-3次差時(shí)消化培養(yǎng)的原代細(xì)胞即得到純化的乳腺上皮細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞角蛋白18的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，鑒定結(jié)果顯示陽(yáng)性，即所培養(yǎng)的細(xì)胞為上皮型。且奶牛乳腺上皮細(xì)胞在波長(zhǎng)為514nm光激發(fā)下，細(xì)胞發(fā)出紅色熒光。證明乳腺上皮細(xì)胞具有自發(fā)熒光的特性。利用奶牛乳房炎源金黃色葡萄球菌和EGFP標(biāo)記E.coli BL21感染乳腺上皮細(xì)胞，制作細(xì)菌菌黏附乳腺細(xì)胞的模型，革蘭氏染色法、E.coli BL21經(jīng)IPTG誘導(dǎo)發(fā)熒光后，利用普通光學(xué)顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡和電子掃描顯微鏡觀察：奶牛乳腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)被染成淺粉... 

【文章來(lái)源】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

培養(yǎng)2-3d貼壁后游離出的細(xì)胞（40×）

組織塊一般在48 h內(nèi)可全部貼壁，培養(yǎng)2-3 d，少量細(xì)胞先從組織塊周?chē)坞x出來(lái)，細(xì)胞形態(tài)呈梭形或放射狀，為成纖維細(xì)胞，圖2-1；也有部分組織塊周?chē)坞x出來(lái)細(xì)胞呈不規(guī)則的多邊形，為乳腺上皮細(xì)胞，圖2-2。培養(yǎng)5-6 d，以組織塊為中心，組織塊周?chē)霈F(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)呈規(guī)則毛流樣。外層為成纖維細(xì)胞，內(nèi)層為乳腺上皮細(xì)胞，圖2-3；組織塊周?chē)苯佑坞x出乳腺上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)為“煎荷包蛋”狀，圖2-4；培養(yǎng)8-10 d，絕大多數(shù)組織塊間細(xì)胞呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)，數(shù)量顯著增多，形成集落，呈單層“鋪路石”狀生長(zhǎng)，細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)板孔底80%左右，圖2-5。經(jīng)2-3次差時(shí)消化純化細(xì)胞后可見(jiàn)均勻“鋪路石”狀的乳腺上皮細(xì)胞，圖2-6。在上皮細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中

圖 2-1 培養(yǎng) 2-3 d 貼壁后游離出的細(xì)胞（40×） 圖 2-2 培養(yǎng) 2-3 d 直接出現(xiàn)乳腺細(xì)胞（40×）Fig. 2-1 Free out cell in 2-3 days after adherent（40×） Fig. 2-2 Mammary cell in 2-3d days (40×)圖2-3 培養(yǎng)5-6 d分層的細(xì)胞（40×） 圖2-4 培養(yǎng)5-6 d出現(xiàn)“煎荷包蛋狀”（40×）Fig. 2-3 Layered cellsl in 5-6 days (40×) Fig. 2-4 “Fried egg shape” cell in 5-6 days (40×)圖2-5 80%匯合的單層細(xì)胞（40×） 圖2-6 純化后“鋪路石”狀上皮細(xì)胞（100×）Fig. 2-5 80% confluent monolayer cells (40×) Fig. 2-6 “Cobblestone”-like epithelial cell (100×)


本文編號(hào)：2986066