發(fā)布時間：2021-01-16 12:02

　　鴨坦布蘇病毒病是由鴨坦布蘇病毒（Duck Tembusu virus,DTMUV）引起以蛋鴨產蛋下降、雛鴨生長遲緩等為特征的新發(fā)傳染病。2010年以來,在我國安徽、浙江、山東、江蘇、福建等地區(qū)的鴨場中檢測到DTMUV。該病毒已成為嚴重影響我國鴨群健康的新發(fā)病原體。NS1蛋白是DTMUV的非結構蛋白,主要與病毒RNA復制與致病作用有關,同時,NS1蛋白有多個抗原表位,能夠誘導機體產生特異性抗體。根據DTMUV AH-F10株的全基因組序列（GenBank登錄號:KM102539）設計一對引物,通過RT-PCR擴增NS1基因,構建NS1蛋白表達載體pET32a-NS1。將重組質粒pET32a-NS1轉化到BL21大腸桿菌,經IPTG誘導表達,獲得分子量大小為62 kDa的重組目的蛋白。重組表達蛋白包涵體經純化、復性、濃縮后,SDS-PAGE和Western blotting分析鑒定,結果表明獲得的重組NS1蛋白能與DTMUV陽性血清發(fā)生特異性反應。以純化的重組NS1蛋白為包被抗原,通過優(yōu)化包被濃度、封閉條件、血清稀釋度、反應時間等,建立了基于NS1非結構蛋白的間接ELISA（NS1-ELI... 

【文章來源】：安徽農業(yè)大學安徽省

【文章頁數】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

DTMUV結構模式

胚體會在 48~144 h 內死亡，胚體會出現水腫、出血、肝臟腫大并且駁狀壞死等現象，而且絨毛尿囊膜增厚[6, 16-18]。病毒感染細胞最早可在接種察到細胞病變（Cytopathic effect, CPE），主要表現為細胞變圓，融合或者脫間隙擴大，培養(yǎng)基會變成黃色[19, 20]。 DTMUV 的基因組結構DTMUV 的基因組是不分節(jié)段的單股正鏈 RNA，大小約 10990bp[21, 22]�；�5’端有Ⅰ型帽子結構（m7GpppAmp），3’端沒有 poly（A）尾巴[23, 24]。整個組中只包含一個開放閱讀框（Open reading frame, ORF），編碼一個氨基酸minoacid, aa）含量為 3425 的多聚蛋白前體，該多聚蛋白前體經過宿主加工為成熟的功能蛋白，成熟的功能蛋白在信號肽的作用下可以水解為 10 個病其中包括 3 個結構蛋白，它們分別是核衣殼蛋白（C 蛋白）、外膜蛋白前體（）和囊膜蛋白（E 蛋白）；7 個非結構蛋白，分別是 NS1、NS2A、NS2B、NA、NS4B 和 NS5[25, 26]。開放閱讀框的兩端是高度結構化的非編碼區(qū)（untransons, UTR），包括黃病毒大多數的保守序列，圖 1-2[27]。

2- 1 NS1 基因 RT-PCR 擴增.2-1 RT-PCR results of NS1 g子質量標準；1：NS1 基因 P Marker ; 1: PCR products of提取質粒后進行雙酶去上海生工公司測序bpM 115000bp5000000000501056 b

【參考文獻】：
期刊論文
[1]坦布蘇病毒熒光定量RT-PCR檢測方法的建立及初步應用[J]. 王楠楠,劉芳,許漩,張世偉,聶睿,殷冬冬,劉光清,王桂軍.  中國獸醫(yī)科學. 2015(01)
[2]禽坦布蘇病毒感染的宿主及臨床表現[J]. 黃瑜,蘇榮茂,傅光華,萬春和,陳紅梅,傅秋玲,陳珍,施少華,程龍飛,林建生.  中國獸醫(yī)雜志. 2014(11)
[3]黃病毒屬病毒E蛋白結構和功能研究進展[J]. 寇甜甜,丁天兵.  微生物學免疫學進展. 2014(03)
[4]檢測坦布蘇病毒的雙抗體夾心ELISA方法建立及初步應用[J]. 謝星星,李銀,李祥瑞,趙冬敏,黃欣梅,韓凱凱,劉玉卓.  畜牧與獸醫(yī). 2014(05)
[5]檢測鴨坦布蘇病毒乳膠凝集試驗的建立及初步應用[J]. 施少華,萬春和,傅光華,程龍飛,陳紅梅,傅秋玲,林建生,黃瑜.  福建農業(yè)學報. 2014(04)
[6]檢測坦布蘇病毒病抗體NS1-ELISA方法的建立與初步應用[J]. 謝星星,李祥瑞,李銀,趙冬敏,黃欣梅,韓凱凱,劉宇卓,游園.  浙江農業(yè)學報. 2014(01)
[7]鵝源坦布蘇病毒RT-LAMP快速檢測方法的建立[J]. 韓凱凱,李銀,黃欣梅,趙冬敏,劉宇卓,謝星星,游園.  浙江農業(yè)學報. 2014(01)
[8]鴨坦布蘇病毒山東株的分離鑒定及其特性[J]. 葛平萍,刁有祥,唐熠,劉鑫,高緒慧,于春梅,曲俊姿.  中國獸醫(yī)學報. 2014(01)
[9]鴨坦布蘇病毒鴨胚成纖維細胞適應病毒編碼基因序列測定及分析[J]. 李云霞,劉曉麗,張玥,韓宗璽,邵昱昊,劉勝旺,孔憲剛.  中國預防獸醫(yī)學報. 2013(10)
[10]鴨坦布蘇病毒SYBR GreenⅠ實時熒光定量檢測方法的建立[J]. 萬春和,朱海俠,施少華,黃瑜,程龍飛,傅光華,陳紅梅.  中國獸醫(yī)學報. 2013(07)

博士論文
[1]H9N2亞型禽流感病毒與鴨坦布蘇病毒的生物學特性研究及疫苗的初步研制[D]. 徐大偉.內蒙古農業(yè)大學 2012

碩士論文
[1]坦布蘇病毒SDS-70株弱毒苗的制備及安全性與免疫效力的初步評價[D]. 張欣.山東農業(yè)大學 2017
[2]鴨坦布蘇病毒AH-F10株油乳劑滅活疫苗免疫效力評價[D]. 聶睿.安徽農業(yè)大學 2015
[3]坦布蘇病毒NS5蛋白單克隆抗體的制備與鑒定及快速檢測膠體金試紙條方法的建立[D]. 楊國平.山東農業(yè)大學 2015
[4]鴨坦布蘇病毒FSD1株的生物學特性研究及基因組序列分析[D]. 楊英閣.山東農業(yè)大學 2014
[5]坦布蘇病毒山東株SD/02的分離鑒定、DNA疫苗的構建及其免疫效果[D]. 曲俊姿.山東農業(yè)大學 2013
[6]鴨坦布蘇病毒E蛋白單克隆抗體的制備及間接ELISA方法的建立[D]. 姬希文.內蒙古農業(yè)大學 2012
[7]鵝黃病毒JS804株生物學特性的研究及抗E蛋白單克隆抗體的制備與初步應用[D]. 鈕慧敏.南京農業(yè)大學 2012



本文編號：2980793