鴨坦布蘇病毒病是由鴨坦布蘇病毒（Duck Tembusu virus,DTMUV）引起以蛋鴨產(chǎn)蛋下降、雛鴨生長遲緩等為特征的新發(fā)傳染病。2010年以來,在我國安徽、浙江、山東、江蘇、福建等地區(qū)的鴨場中檢測到DTMUV。該病毒已成為嚴重影響我國鴨群健康的新發(fā)病原體。NS1蛋白是DTMUV的非結(jié)構(gòu)蛋白,主要與病毒RNA復(fù)制與致病作用有關(guān),同時,NS1蛋白有多個抗原表位,能夠誘導(dǎo)機體產(chǎn)生特異性抗體。根據(jù)DTMUV AH-F10株的全基因組序列（GenBank登錄號:KM102539）設(shè)計一對引物,通過RT-PCR擴增NS1基因,構(gòu)建NS1蛋白表達載體pET32a-NS1。將重組質(zhì)粒pET32a-NS1轉(zhuǎn)化到BL21大腸桿菌,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達,獲得分子量大小為62 kDa的重組目的蛋白。重組表達蛋白包涵體經(jīng)純化、復(fù)性、濃縮后,SDS-PAGE和Western blotting分析鑒定,結(jié)果表明獲得的重組NS1蛋白能與DTMUV陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng)。以純化的重組NS1蛋白為包被抗原,通過優(yōu)化包被濃度、封閉條件、血清稀釋度、反應(yīng)時間等,建立了基于NS1非結(jié)構(gòu)蛋白的間接ELISA（NS1-ELI... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學安徽省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

DTMUV結(jié)構(gòu)模式

胚體會在 48~144 h 內(nèi)死亡，胚體會出現(xiàn)水腫、出血、肝臟腫大并且駁狀壞死等現(xiàn)象，而且絨毛尿囊膜增厚[6, 16-18]。病毒感染細胞最早可在接種察到細胞病變（Cytopathic effect, CPE），主要表現(xiàn)為細胞變圓，融合或者脫間隙擴大，培養(yǎng)基會變成黃色[19, 20]。 DTMUV 的基因組結(jié)構(gòu)DTMUV 的基因組是不分節(jié)段的單股正鏈 RNA，大小約 10990bp[21, 22]�；�5’端有Ⅰ型帽子結(jié)構(gòu)（m7GpppAmp），3’端沒有 poly（A）尾巴[23, 24]。整個組中只包含一個開放閱讀框（Open reading frame, ORF），編碼一個氨基酸minoacid, aa）含量為 3425 的多聚蛋白前體，該多聚蛋白前體經(jīng)過宿主加工為成熟的功能蛋白，成熟的功能蛋白在信號肽的作用下可以水解為 10 個病其中包括 3 個結(jié)構(gòu)蛋白，它們分別是核衣殼蛋白（C 蛋白）、外膜蛋白前體（）和囊膜蛋白（E 蛋白）；7 個非結(jié)構(gòu)蛋白，分別是 NS1、NS2A、NS2B、NA、NS4B 和 NS5[25, 26]。開放閱讀框的兩端是高度結(jié)構(gòu)化的非編碼區(qū)（untransons, UTR），包括黃病毒大多數(shù)的保守序列，圖 1-2[27]。

2- 1 NS1 基因 RT-PCR 擴增.2-1 RT-PCR results of NS1 g子質(zhì)量標準；1：NS1 基因 P Marker ; 1: PCR products of提取質(zhì)粒后進行雙酶去上海生工公司測序bpM 115000bp5000000000501056 b

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]H9N2亞型禽流感病毒與鴨坦布蘇病毒的生物學特性研究及疫苗的初步研制[D]. 徐大偉.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2012

碩士論文
[1]坦布蘇病毒SDS-70株弱毒苗的制備及安全性與免疫效力的初步評價[D]. 張欣.山東農(nóng)業(yè)大學 2017
[2]鴨坦布蘇病毒AH-F10株油乳劑滅活疫苗免疫效力評價[D]. 聶睿.安徽農(nóng)業(yè)大學 2015
[3]坦布蘇病毒NS5蛋白單克隆抗體的制備與鑒定及快速檢測膠體金試紙條方法的建立[D]. 楊國平.山東農(nóng)業(yè)大學 2015
[4]鴨坦布蘇病毒FSD1株的生物學特性研究及基因組序列分析[D]. 楊英閣.山東農(nóng)業(yè)大學 2014
[5]坦布蘇病毒山東株SD/02的分離鑒定、DNA疫苗的構(gòu)建及其免疫效果[D]. 曲俊姿.山東農(nóng)業(yè)大學 2013
[6]鴨坦布蘇病毒E蛋白單克隆抗體的制備及間接ELISA方法的建立[D]. 姬希文.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2012
[7]鵝黃病毒JS804株生物學特性的研究及抗E蛋白單克隆抗體的制備與初步應(yīng)用[D]. 鈕慧敏.南京農(nóng)業(yè)大學 2012



本文編號：2980793