目的：豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiration syndrome,PRRS）,是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的一種具有較強傳染性的常見豬病,病毒的一個典型特點就是極易變異,一旦爆發(fā),就會給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。目前針對該病主要是采取注射疫苗的方式進行預(yù)防,但是,尚沒有針對患病個體的有效治療方法。本試驗選擇3種天然化合物綠原酸、連翹酯苷A和表告依春,分別提取于具有抗病毒作用的常見中草藥金銀花、連翹和板藍根。以3D4/2細胞為體外模型,研究三種中藥高效成分是否具有增強豬肺巨噬細胞非特異性免疫的作用,是否能夠抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒對細胞的感染作用,是否能夠抑制由PRRS病毒引起的細胞凋亡,并初步探討這些中藥主要成分的抗病毒機制。方法：（1）采用免疫細胞化學(xué)的方法對所使用的3D4/2細胞進行鑒定。（2）運用細胞病變法（Cytopathic effect, CPE）以及噻唑藍比色法（3-（4,5-dimethyithiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT）來確定中藥化合物在3D4... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１正常３Ｄ４／２細胞及蘇木精染色后結(jié)果（Ｘ１００）??

圖２?３Ｄ４／２細胞鑒定結(jié)果（ｘ２００）??Ｆｉｇ．２?３Ｄ４／２?ｃｅｌｌｓ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?（＾２００）??（Ａ）用表皮生長因子樣激素受體１抗體作為一抗，正常３Ｄ４／２細胞出現(xiàn)陽性反應(yīng)（Ｂ）用??ＰＢＳ代替表皮生長因子樣激素受體１抗體，作為對照姐，未出現(xiàn)陽性反應(yīng)。??）?Ｗｉ化化ｅ?Ｆ４／８０?ａｎｔ化ｏｄｉｅｓ?ａｓ?化ｅ?ｆｉｒｓｔ?ａｎｔ化ｏｄｙ，ｎｏｒｍａｌ?３Ｄ４／２?ｃｅｌｌｓ?ｓｈｏｗｅｄ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ．（Ｂ）?Ｉｎｓ化ａｄ?ｏｆ??Ｆ４／８０?ａｎｔ化ｏｄｙ?ｗｉ化?Ｐ目Ｓ?ａｓ?ａ?ｃｏｎ化ｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｄｉｄ?ｎｏｔ?ａｐｐｅａｒ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ．??圖中出現(xiàn)蹤黃色位冒為陽性反應(yīng)部位，表明該部分有仙應(yīng)抗版與所用抗體結(jié)合，??色指示細胞核Ｗ及細胞質(zhì)中的嗜堿性物質(zhì)。山閣２可見，細胞表現(xiàn)山對Ｆ４／８０抗??陽性反應(yīng)，且特巧巧衷達在細胞膜，說明細胞表面有表皮生長因子樣激素受體１。??藥物最適濃度結(jié)果??經(jīng)試驗并對試驗數(shù)據(jù)進行處理后確定各藥物的最大安全濃度（可使９０％Ｗ上的??／２細胞巧常存活的藥物濃度）為：綠原酸的最大安全濃度為２５０?＾１３／１１止，連翔醋昔??最大安全濃度為１２５ｉ／ｍＬ，表告依春的最大安全濃度為１０００ｙｇ／ｍＬ。??

ｐｏｓｉｔｉｖｅ．（Ｂ）?Ｉｎｓｔｅａｄ?ｏｆ?Ｍ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｏｆ?ＰＲＲＳＶ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｗｉｔｈ?ＰＢＳ?ａｓ?ａ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｄｉｄ?ｎｏｔ?ａｐｐｅａｒ??ｐｏｓｉｔｉｖｅ．??由圖３可見，攻毒后３Ｄ４／２細胞出現(xiàn)了化性反應(yīng)。目前的研究衷明，巨峰細胞本??身具有巧晦能力，但巨晦細胞將病毒吞晦后所俘化的部位應(yīng)該屆細胞質(zhì)而非細胞核，??試驗結(jié)果中可Ｗ看到細胞核中也出現(xiàn)陽性反應(yīng)，說明出現(xiàn)陽性反應(yīng)不僅僅是吞噓所致，??也存在ＰＲＲＳＶ對巨略細胞的主動侵染，其侵染部位包括細胞核。??４小結(jié)??細胞免疫化學(xué)的結(jié)果衷明，ＰＲＲＳＶ能夠?qū)Γ常模矗布毎M行侵染，攻毒后能夠使??３Ｄ４／２細胞產(chǎn)生病變。說明３Ｄ４／２細胞能被ＰＲＲＳＶ感染，并且觀察到病毒的侵染部位??是細胞核和細胞質(zhì)。??－２１?－??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]熱毒寧注射液抗病毒活性成分研究（Ⅰ）[J]. 李海波,于洋,王振中,蕭偉,姚新生.  中草藥. 2014(12)
[2]熱毒寧注射液抗A16型柯薩奇病毒的研究[J]. 曹澤彧,常秀娟,趙忠鵬,曹亮,周軍,王振中,蕭偉.  中草藥. 2014(10)
[3]板藍根多肽對流感病毒感染小鼠抗病毒作用的研究[J]. 劉西京,林素靜.  中國藥房. 2014(07)
[4]熱毒寧注射液抗甲型H1N1流感病毒作用機制研究[J]. 王振中,鮑琳琳,孫蘭,畢宇安,周軍,蕭偉.  中草藥. 2014(01)
[5]板藍根抗病毒有效部位的化學(xué)成分及其活性研究[J]. 何立巍,董偉,楊婧妍,李祥,李偉.  中草藥. 2013(21)
[6]板藍根活性部位對細胞凋亡和RAW264.7表達IL-10、TNF-α的影響[J]. 董偉,張軍峰,何立巍,許冬青,詹瑧.  上海中醫(yī)藥雜志. 2012(08)
[7]豬繁殖與呼吸綜合征疫苗研究現(xiàn)狀[J]. 沈武玲,喬自林,令世鑫,馮玉萍,馮若飛,李明生,林學(xué)仕,柏家林,王家敏,馬忠仁.  動物醫(yī)學(xué)進展. 2012(01)
[8]基于抗病毒活性檢測的板藍根質(zhì)量生物評價方法及優(yōu)化研究[J]. 李寒冰,鄢丹,武彥舒,肖小河,唐慧英,張少峰.  中草藥. 2011(08)
[9]綠原酸對過氧化氫誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞凋亡的保護作用[J]. 卞合濤,王曄,龔黎民,劉蓉蓉,黃衛(wèi).  中國藥理學(xué)通報. 2010(12)
[10]2010年上半年我國部分地區(qū)豬場疫情與PRRS疫苗接種狀況調(diào)查[J]. 唐利,彭明義,李江,杜興元,許吉秋,董依滿,郭林,丁甫林.  豬業(yè)科學(xué). 2010(09)

博士論文
[1]豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染引起細胞凋亡的機理研究[D]. 馬志濤.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]四種中藥多糖增強免疫和抗病毒作用及機理研究[D]. 邱妍.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]豬肺泡巨噬細胞（PAM）極化模型的建立及PRRSV感染過程中動態(tài)變化研究[D]. 徐璐.延邊大學(xué) 2014
[2]板藍根抗流感病毒的生化機理研究[D]. 吳靈威.福州大學(xué) 2005



本文編號：2980822