奶牛乳腺炎作為影響奶牛業(yè)發(fā)展的主要疾病之一,不僅損害了奶牛的健康,而且導(dǎo)致了乳制品質(zhì)量的降低,其中病原微生物是誘導(dǎo)乳腺炎產(chǎn)生的首要因素,許多病原微生物能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并以此影響疾病的發(fā)生及發(fā)展過程。為了研究金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）、大腸桿菌（Escherichia coli,E.coli）感染奶牛乳腺上皮細(xì)胞（Bovine Mammary Epithelial Cells,BMECs）對主要炎性因子表達(dá)和細(xì)胞凋亡的影響,本實驗通過改進(jìn)聯(lián)合酶消化組織塊法成功體外培養(yǎng)了BMECs并進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定。選取純化后第5代BMECs,分別加入不同濃度的S.aureus、E.coli,經(jīng)公式計算感染量為0.6 mL得出最佳感染濃度。再分別加入活菌比（MOI）為100:1最佳濃度的S.aureus、E.coli對細(xì)胞進(jìn)行感染,在感染后第0、3、6、9、12小時取樣。通過實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）檢測對IL-1β、IL1RⅠ及TNF-α的表達(dá),利用Tunel（terminal d... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

奶牛的原代乳腺上皮細(xì)胞光鏡觀察

圖 2 奶牛乳腺上皮細(xì)胞的免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定結(jié)果Figure2 Immunocyetochmical characteristics of cow mammary epithelial cellsA：角蛋白 18 染色陽性；B：β-酪蛋白染色陽性；C：波形蛋白染色陰性；D：陰性對照A:Positive staining for cytokeratin 18. B:Positive staining for β-casein.

2 結(jié)果與分析2.1 引物特異性的確定利用凝膠電泳對PCR產(chǎn)物進(jìn)行檢測，圖3、4為以β-actin為內(nèi)參，引物IL-1β、IL1RⅠ、TNF-α 基因的擴(kuò)增產(chǎn)物，并未產(chǎn)生二聚體，可用于后續(xù)實驗。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8基因的克隆及其在乳腺上皮細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 李月琴,潘陽陽,田奎麗,趙天,張譯夫,樊江峰,崔燕,余四九.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2017(01)
[2]IGF-I和EGF對牦牛乳腺上皮細(xì)胞SND1表達(dá)的影響[J]. 田奎麗,潘陽陽,李月琴,崔燕,余四九.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2016(11)
[3]脂多糖對奶牛乳腺上皮細(xì)胞IL-6、IL-8和TNF-α mRNA表達(dá)的影響[J]. 李艷,呂曉峰,徐凱,丁立彤,趙國琦.  上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2016(05)
[4]外源性IL-6與TNF-α對乳腺炎奶牛乳汁中性粒細(xì)胞凋亡的影響[J]. 趙彌,張迪,丁玉林,吳建美,畢艷楠,王金玲,王一,于亞娟,王鳳龍.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2016(17)
[5]一株奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌噬菌體的分離鑒定及其生物學(xué)特性的研究[J]. 范錦戴,申曉晨,馬若瑤,馮嘉琪,麥凱杰,曾志良,馬靜云.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2015(12)
[6]FSH促進(jìn)牦牛輸卵管上皮細(xì)胞分泌輸卵管特異性糖蛋白的研究[J]. 楊融,潘陽陽,崔燕,樊江峰,何俊峰,余四九.  獸類學(xué)報. 2015(02)
[7]初產(chǎn)牛乳腺炎的研究進(jìn)展[J]. 熊雁青,曾超鋒.  現(xiàn)代畜牧科技. 2015(01)
[8]奶牛乳腺細(xì)菌感染防御機制研究進(jìn)展[J]. 王敬,雍康,吳有華,楊慶穩(wěn).  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(09)
[9]荷斯坦奶牛乳腺上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)[J]. 厲世偉,谷靜娟,趙璐,李龍,王雪濤,況玲.  中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志. 2013(01)
[10]不同濃度脂多糖刺激奶牛乳腺上皮細(xì)胞對NF-κB及LAP表達(dá)的影響[J]. 程蘭玲,曹貴方,溫世勇,趙鵬偉,凃勇,菅瑞珍,李琦.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2012(10)

碩士論文
[1]大腸桿菌對奶牛乳腺成纖維細(xì)胞TGF-β1、bFGF和PDGF表達(dá)的影響[D]. 王一.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]TGFβ1對奶牛乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞增殖的影響及其信號機制的初步研究[D]. 李瑩瑩.吉林大學(xué) 2014
[3]奶牛乳腺炎大腸桿菌優(yōu)勢血清型相關(guān)毒力基因與耐藥基因的檢測與序列分析[D]. 馬超.寧夏大學(xué) 2014
[4]奶牛乳腺炎主要病原菌的調(diào)查[D]. 何挺.浙江大學(xué) 2010
[5]奶牛乳腺炎乳汁三種細(xì)胞因子檢測及TNF-α對乳腺細(xì)胞凋亡和增殖的影響[D]. 楊磊.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[6]奶山羊乳房炎的淋巴細(xì)胞與乳腺上皮細(xì)胞凋亡規(guī)律[D]. 楊慶麗.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號：2980712