禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒（Reticuloendotheliosis virus, REV）感染可引起禽類的腫瘤、生長障礙和免疫抑制,導(dǎo)致禽類生產(chǎn)性能的降低以及疫苗免疫的失敗,對養(yǎng)殖業(yè)的危害巨大。REV既可以水平傳播,又能垂直傳播,還能污染弱毒疫苗造成大范圍的擴(kuò)散。因此,有必要建立檢測弱毒疫苗和臨床樣品中REV的方法。本研究采用PCR方法擴(kuò)增編碼REV群特異性抗原p30的基因,分別克隆到大腸桿菌表達(dá)載體pGEX-6P-1和pET-32a（+）。將重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)分別獲得49kD和43.4kD的重組蛋白GST-p30與His-p30,經(jīng)高親和力的GST樹脂和NI-NTA樹脂純化,以純化的重組蛋白GST-p30免疫BALB/c小鼠制備脾細(xì)胞,與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合；以純化的重組蛋白His-p30作為ELISA檢測抗原篩選陽性克隆,經(jīng)3-4次亞克隆,共獲得8株可穩(wěn)定分泌針對p30抗原單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,分別命名為1A10、2G1、4G2、4D9、2-4D9、8G3、9F2和12F2。經(jīng)鑒定這8株單抗的ELISA效價可達(dá)1：6,400～1：204,80... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
符號說明
綜述 禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥的病原特點和檢測技術(shù)
    1. 病原特點
        1.1 基因組結(jié)構(gòu)
        1.2 主要功能蛋白
        1.3 病毒復(fù)制
        1.4 傳播方式
    2. 檢測技術(shù)
        2.1 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）
        2.2 DNA斑點雜交（DOT-BLOT）
        2.3 環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法（LAMP）
        2.4 實時熒光定量PCR
        2.5 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）
        2.6 間接免疫熒光試驗（IFA）
檢測禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒的間接免疫熒光試驗建立及應(yīng)用
    1. 材料
        1.1 毒株、細(xì)胞系和實驗動物
        1.2 菌株、載體
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器設(shè)備
        1.5 疫苗樣品
        1.6 病料樣品
    2. 方法
        2.1 p30蛋白的原核表達(dá)和純化
        2.2 針對REV p30蛋白單克隆抗體的制備
        2.3 單克隆抗體的鑒定
        2.4 檢測REV的IFA方法最佳工作條件的優(yōu)化
        2.5 弱毒疫苗中REV的檢測
        2.6 病料中REV的檢測
        2.7 REV分離株的遺傳進(jìn)化分析
    3. 結(jié)果
        3.1 REV p30蛋白的原核表達(dá)及純化
        3.2 單克隆抗體的制備
        3.3 檢測REV的IFA方法條件優(yōu)化
        3.4 臨床樣品中REV的檢測
        3.5 REV分離株的遺傳進(jìn)化分析
    4. 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：2979315