豬瘟（classical swine fever, CSF）是由豬瘟病毒（classical swine fever virus, CSFV）引起豬的一類具有高度危害性的傳染病,具有高度接觸性、傳播快速的臨床特點(diǎn)。在當(dāng)前的養(yǎng)殖過程中,由于疫苗的不恰當(dāng)使用和病毒自身變異等因素,豬瘟的流行發(fā)生了改變,在豬群中該病從大規(guī)模的流行轉(zhuǎn)變?yōu)榈胤叫陨l(fā),在個(gè)體豬只中該病多以非典型性、慢性及隱性形式出現(xiàn),這種非典型性、慢性及隱性帶毒常常會(huì)出現(xiàn)在母豬群中,造成妊娠母豬流產(chǎn),產(chǎn)死胎、木乃伊胎等繁殖障礙,同時(shí)也會(huì)造成母豬的垂直傳播及豬群中水平傳播,從而給養(yǎng)豬業(yè)帶來極大的危害。本研究通過制備抗豬瘟病毒單克隆熒光抗體,旨在為豬瘟病毒的檢測(cè)提供一種快速而又敏感的檢測(cè)試劑。具體研究內(nèi)容如下：1.豬瘟病毒單克隆熒光抗體的制備復(fù)蘇和擴(kuò)大培養(yǎng)由本實(shí)驗(yàn)室研制的豬瘟主要保護(hù)性抗原E2囊膜蛋白單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞AH9株,通過Babl/c小鼠腹腔注射雜交瘤細(xì)胞,大量制備了豬瘟單克隆抗體,運(yùn)用辛酸-硫酸銨法與Sephadex G-25快速蛋白純化系統(tǒng)進(jìn)行純化,得到濃度較高的豬瘟單克隆抗體（蛋白濃度為11.491mg/mL）。經(jīng)S... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1. 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬瘟概述
    1.2 豬瘟病毒研究進(jìn)展
        1.2.1 豬瘟病毒粒子的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 豬瘟病毒的生物學(xué)特性
        1.2.3 豬瘟病毒基因組結(jié)構(gòu)
        1.2.5 豬瘟病毒所編碼蛋白及其功能
    1.3 豬瘟病毒的致病機(jī)制
    1.4 豬瘟全球流行現(xiàn)狀
    1.5 豬瘟病毒診斷方法研究進(jìn)展
        1.5.1 豬瘟臨床診斷
        1.5.2 豬瘟抗體檢測(cè)方法
        1.5.3 豬瘟病毒檢測(cè)方法
2. 目的與意義
3 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 質(zhì)控毒株及陰性參考模板
        3.1.2 待檢樣品
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要試劑及酶
        3.1.5 細(xì)胞株和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 豬瘟病毒AH9株雜交瘤細(xì)胞的復(fù)蘇和培養(yǎng)
        3.2.2 豬瘟病毒單克隆抗體的制備及純化
        3.2.3 豬瘟病毒單克隆熒光抗體的制備與純化
        3.2.4 豬瘟病毒單克隆熒光抗體實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        3.2.5 豬瘟直接免疫熒光檢測(cè)方法的初步應(yīng)用
4 結(jié)果與分析
    4.1 豬瘟病毒AH9株雜交瘤細(xì)胞的復(fù)蘇與鑒定
    4.2 豬瘟病毒單克隆抗體的制備及純化
        4.2.1 豬瘟病毒單克隆抗體純度的測(cè)定
        4.2.2 豬瘟病毒單克隆抗體濃度的測(cè)定
        4.2.3 豬瘟病毒單克隆抗體效價(jià)的測(cè)定
    4.3 豬瘟病毒單克隆抗體熒光素的標(biāo)記及純化
    4.4 豬瘟病毒單克隆熒光抗體實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化及2種檢測(cè)方法的符合對(duì)比性實(shí)驗(yàn)
        4.4.1 豬瘟病毒單克隆熒光抗體實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        4.4.2 豬瘟單克隆熒光抗體與RT-Nested PCR樣品檢測(cè)符合對(duì)比性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.5 豬瘟直接免疫熒光抗體的臨床應(yīng)用
        4.5.1 組織樣品檢測(cè)
        4.5.2 送檢樣品檢測(cè)
5 討論
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]豬瘟病毒強(qiáng)毒株與疫苗C株鑒別方法的建立及疫苗病毒定量檢測(cè)的研究[D]. 李安.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[2]豬瘟病毒結(jié)構(gòu)蛋白與生物學(xué)特性的關(guān)系[D]. 朱元源.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 2010
[3]豬瘟病毒套式RT-PCR檢測(cè)方法的建立和種豬場(chǎng)豬瘟免疫與凈化研究[D]. 羅勇.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號(hào)：2977529