發(fā)布時(shí)間：2021-01-12 19:42

　　腸炎沙門氏菌（Salmonella enterica,SE）是一種兼性細(xì)胞內(nèi)病原菌,能夠引起多種動(dòng)物發(fā)病。疫苗免疫是阻止SE進(jìn)入食物鏈的一種有效方式,相對(duì)于滅活疫苗而言,弱毒疫苗對(duì)預(yù)防SE的腸道定植和全身性感染具有更好的效果。因此,研究一種安全、有效的疫苗是控制SE傳播的首要任務(wù)。SE存在許多毒力相關(guān)基因,這些毒力相關(guān)基因的連鎖作用,能夠保證SE在營(yíng)養(yǎng)缺乏的特殊宿主環(huán)境中生存并避免被宿主免疫系統(tǒng)清除。SE入侵宿主細(xì)胞是沙門氏菌感染的一個(gè)重要階段,其入侵宿主細(xì)胞的過程需要侵襲基因的表達(dá),hil A基因是對(duì)侵襲基因表達(dá)控制的一個(gè)主導(dǎo)者。環(huán)腺苷酸磷酸二酯酶（cpd B）基因可以水解細(xì)胞內(nèi)第二信使（c AMP,環(huán)磷酸腺苷或c GMP,環(huán)磷酸鳥苷）,從而終結(jié)這些第二信使所傳導(dǎo)的對(duì)細(xì)胞活動(dòng)有重要調(diào)節(jié)功能的生化作用。為了進(jìn)一步致弱SE的毒力,本研究通過Red重組的方法,在本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建雙基因缺失菌株SM6△cpx R/lon基礎(chǔ)上,通過缺失hil A基因和cpd B基因構(gòu)建了無抗性標(biāo)記的三基因缺菌株SM6△cpx R/lon/hil A和四基因缺失菌株SM6△cpx R/lon/hil A/cpd ... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：98 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 引言
    1.1 沙門氏菌的研究概況
        1.1.1 沙門氏菌的病原學(xué)特征
        1.1.2 沙門氏菌的致病機(jī)制
        1.1.3 沙門氏菌主要毒力因子的研究進(jìn)展
        1.1.4 細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的第二信使及其信號(hào)傳導(dǎo)
    1.2 Red重組系統(tǒng)
        1.2.1 Red重組系統(tǒng)的組成與作用機(jī)理
        1.2.2 Red重組的相關(guān)質(zhì)粒與Red重組的應(yīng)用
    1.3 沙門氏菌基因突變體疫苗
        1.3.1 沙門氏菌基因突變體疫苗研究背景
        1.3.2 沙門氏菌基因突變體疫苗的研究概況
    1.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 質(zhì)粒與菌株
        2.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 基因缺失株SM6△cpx R/lon/hil A的構(gòu)建
        2.2.2 基因缺失株SM6△cpx R/lon/hil A/cpd B的構(gòu)建
        2.2.3 基因缺失株SM6△cpx R/lon/hil A和SM6△cpx R/lon/hil A/cpd B的生長(zhǎng)和生化特性
        2.2.4 基因缺失株作為候選疫苗的可行性研究
3 結(jié)果
    3.1 SM6△cpx R/lon/hil A基因缺失株的構(gòu)建
        3.1.1 同源重組打靶PCR片段的獲得
        3.1.2 hil A基因的敲除及PCR鑒定
    3.2 SM6△cpx R/lon/hil A/cpd B基因缺失株的構(gòu)建
        3.2.1 同源重組打靶PCR片段的獲得
        3.2.2 cpd B基因的敲除及PCR鑒定
    3.3 基因缺失株SM6△cpx R/lon/hil A和SM6△cpx R/lon/hil A/cpd B的生物學(xué)特性
        3.3.1 生長(zhǎng)特性
        3.3.2 生化特性
        3.3.3 基因缺失株的遺傳穩(wěn)定性
        3.3.4 SM6△cpx R/lon/hil A, SM6△cpx R/lon/hil A/cpd B和SM6侵入率的差異
        3.3.5 細(xì)菌形態(tài)的變化
    3.4 基因缺失株作為候選疫苗的可行性研究
        3.4.1 三基因缺失株SM6△cpx R/lon/hil A的致病力測(cè)定
        3.4.2 四基因缺失株SM6△cpx R/lon/hil A/cpd B的致病力測(cè)定
        3.4.3 細(xì)菌在體內(nèi)定植清除情況及對(duì)組織病理?yè)p傷的檢測(cè)
        3.4.4 免疫途徑的確定
        3.4.5 免疫劑量的確定
        3.4.6 SPF雞免疫后血清特異性抗體的動(dòng)態(tài)變化
        3.4.7 SPF雞免疫后雞脾臟CD4+、CD8+T細(xì)胞亞群百分比的動(dòng)態(tài)變化
        3.4.8 SPF雞免疫后外周血細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)變化
        3.4.9 SPF雞攻菌后的保護(hù)情況
        3.4.10 SPF雞攻菌后荷菌數(shù)的變化及各臟器組織學(xué)病變
        3.4.11 SM6△cpx R/lon/hil A和SM6△cpx R/lon/hil A/cpd B免疫雞只的抗體持續(xù)期試驗(yàn)
4 討論
    4.1 基因缺失株的構(gòu)建、生長(zhǎng)、生化特性和安全性評(píng)價(jià)
    4.2 沙門氏菌基因缺失株疫苗SM6△cpx R/lon/hil A和SM6△cpx R/lon/hil A/cpd B的免疫效果評(píng)價(jià)
        4.2.1 沙門氏菌三基因缺失株SM6△cpx R/lon/hil A和 四基因缺失株SM6△cpx R/lon/hil A/cpd B免疫后對(duì)雞的保護(hù)效果
        4.2.2 沙門氏菌三基因缺失疫苗株SM6△cpx R/lon/hil A和 四基因缺失疫苗株SM6△cpx R/lon/hil A/cpd B對(duì)體液免疫和細(xì)胞免疫的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2973427