乙型腦炎是由日本腦炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)引起的急性傳染病。我國(guó)每年大約有2萬(wàn)多例的乙腦患者,20%-30%的乙腦患者死亡。乙型腦炎屬于自然疫源性疾病,多種動(dòng)物均可感染,其中人、馬、猴、驢感染后會(huì)出現(xiàn)明顯的臨診癥狀,病死率比較高。豬群感染乙腦比較常見(jiàn),死亡率比較低,且大多不出現(xiàn)臨診癥狀。懷孕母豬感染乙腦可表現(xiàn)為高熱、流產(chǎn)、死胎和木乃伊胎,公豬則表現(xiàn)為睪丸炎。JEV屬于黃病毒科,黃病毒屬,病毒粒子直徑為30-40nm。JEV的結(jié)構(gòu)蛋白有C、PrM/M、E三種,其中E蛋白是乙腦病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白,在免疫性和致病性方面起著重要的作用。E蛋白的單體結(jié)構(gòu)包含三個(gè)結(jié)構(gòu)域,結(jié)構(gòu)域Ⅲ（EDⅢ）為免疫球蛋白樣折疊的結(jié)構(gòu)域,是受體的主要結(jié)合部位,有高度的免疫原性。這個(gè)區(qū)域在病毒的診斷分析中是非常有價(jià)值的。此外,單克隆抗體具有特異性好、純度高、效價(jià)高、成本低、可大量生產(chǎn)等優(yōu)勢(shì),在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、蛋白純化與功能研究、疾病的診斷與治療、抗原表位鑒定方面等有很大的開(kāi)發(fā)價(jià)值。本研究以實(shí)驗(yàn)室保存的含pET-28a-EDⅢ質(zhì)粒的甘油菌誘導(dǎo)表達(dá)的EDⅢ蛋白皮下... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 乙型腦炎的研究進(jìn)展
        1 乙型腦炎病毒的病原特征
            1.1 乙型腦炎病毒的分類及形態(tài)
            1.2 乙型腦炎病毒的生物學(xué)特征
            1.3 乙型腦炎病毒的培養(yǎng)特性
            1.4 乙型腦炎病毒對(duì)外界的抵抗力
            1.5 乙型腦炎病毒的致病性
        2 乙型腦炎病毒EDⅢ蛋白研究進(jìn)展
            2.1 乙型腦炎病毒EDⅢ蛋白的重要性
            2.2 乙型腦炎病毒EDⅢ蛋白的研究進(jìn)展
        3 乙型腦炎的流行情況
            3.1 乙型腦炎的流行特點(diǎn)
            3.2 乙型腦炎的分布區(qū)域
            3.3 乙型腦炎的發(fā)病規(guī)律
        4 乙型腦炎的診斷、預(yù)防和治療
            4.1 乙型腦炎的診斷
                4.1.1 乙型腦炎的臨診癥狀
                4.1.2 乙型腦炎的病理變化
                4.1.3 乙型腦炎的臨床診斷
            4.2 乙型腦炎的預(yù)防
                4.2.1 免疫接種
                4.2.2 杜絕傳播媒介
            4.3 乙型腦炎的治療
                4.3.1 乙型腦炎的一般性治療
                4.3.2 乙型腦炎的對(duì)癥治療
                4.3.3 乙型腦炎的抗病毒治療
        5 單克隆抗體技術(shù)和應(yīng)用
            5.1 單克隆抗體的研究進(jìn)展
            5.2 單克隆抗體技術(shù)
                5.2.1 嵌合單克隆抗體技術(shù)
                5.2.2 噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)
                5.2.3 核糖體展示技術(shù)
                5.2.4 RNA-多肽融合技術(shù)
                5.2.5 轉(zhuǎn)基因小鼠制備全人類抗體
            5.3 單克隆抗體的應(yīng)用
                5.3.1 單克隆抗體在免疫組織化學(xué)中的應(yīng)用
                5.3.2 單克隆抗體在病毒學(xué)中的應(yīng)用
                5.3.3 單克隆抗體在細(xì)菌學(xué)中的應(yīng)用
                5.3.4 單克隆抗體在寄生蟲(chóng)中的應(yīng)用
            5.4 乙型腦炎病毒單克隆抗體研究進(jìn)展
        參考文獻(xiàn)
第二部分 實(shí)驗(yàn)研究
    第二章 乙型腦炎病毒EDⅢ蛋白單克隆抗體的制備及鑒定
        1 材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、細(xì)胞系、菌種
            1.2 主要試劑
            1.3 儀器和設(shè)備
        2 方法
            2.1 EDⅢ蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及純化
                2.1.1 EDⅢ蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
                2.1.2 EDⅢ蛋白的親和層析純化
                2.1.3 純化的EDⅢ蛋白的SDS-PAGE凝膠電泳分析
                2.1.4 EDⅢ蛋白Western-blot分析
            2.2 小鼠的免疫
            2.3 間接ELISA方法測(cè)血清效價(jià)
            2.4 SP2/0骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備
                2.4.1 SP2/0骨髓瘤細(xì)胞的復(fù)蘇
                2.4.2 SP2/0骨髓瘤細(xì)胞的篩選及擴(kuò)大培養(yǎng)
            2.5 飼養(yǎng)細(xì)胞的準(zhǔn)備
            2.6 脾細(xì)胞的準(zhǔn)備
            2.7 細(xì)胞融合
            2.8 EDⅢ雜交瘤細(xì)胞株的建立
                2.8.1 陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的篩選
                2.8.2 亞克隆
                2.8.3 雜交瘤細(xì)胞的凍存
            2.9 腹水的制備
            2.10 單克隆抗體的鑒定
                2.10.1 單克隆抗體效價(jià)的測(cè)定
                2.10.2 單克隆抗體Ig亞類的鑒定
                2.10.3 單克隆抗體的特異性鑒定
                2.10.4 雜交瘤細(xì)胞分泌抗體穩(wěn)定性的鑒定
                2.10.5 間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）
        3 結(jié)果
            3.1 EDⅢ蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)、純化及Western-blot鑒定
                3.1.1 EDⅢ蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及純化
                3.1.2 EDⅢ蛋白的Western-blot鑒定
            3.2 EDⅢ蛋白單克隆抗體的鑒定
                3.2.1 EDⅢ蛋白單抗效價(jià)的測(cè)定
                3.2.2 EDⅢ蛋白單抗亞型的測(cè)定
                3.2.3 EDⅢ蛋白單抗特異性鑒定
                3.2.4 EDⅢ蛋白單抗分泌穩(wěn)定性的鑒定
                3.2.5 間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
    第三章 EDⅢ蛋白單克隆抗體對(duì)病毒中和作用的研究
        1 材料
            1.1 細(xì)胞和病毒
            1.2 試劑
            1.3 儀器和設(shè)備
        2 方法
            2.1 乙型腦炎病毒NJ2008株的擴(kuò)增
                2.1.1 鼠腦擴(kuò)增乙型腦炎病毒NJ2008株
                2.1.2 乙型腦炎病毒NJ2008株的鑒定
            2.2 空斑形成試驗(yàn)檢測(cè)乙腦病毒NJ2008株的毒價(jià)
            2.3 空斑減少試驗(yàn)檢測(cè)1C3單抗的中和活性
            2.4 結(jié)果判定
            2.5 乳鼠腦內(nèi)接種單抗和病毒
        3 結(jié)果
            3.1 乙型腦炎病毒NJ2008株的Western-blot鑒定
            3.2 空斑形成試驗(yàn)測(cè)乙腦病毒NJ2008株的毒價(jià)
            3.3 空斑減少試驗(yàn)測(cè)1C3單抗中和活性
            3.4 乳鼠發(fā)病情況統(tǒng)計(jì)
            3.5 乳鼠鼠腦組織解剖觀察
            3.6 乳鼠鼠腦組織和脾臟的HE染色
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]豬乙型腦炎減毒活疫苗與基因免疫研究[D]. 王祥.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2001

碩士論文
[1]河南省乙型腦炎病毒的分離鑒定及E基因進(jìn)化分析[D]. 卜丹.鄭州大學(xué) 2010
[2]日本乙型腦炎實(shí)驗(yàn)室診斷方法的研究和應(yīng)用[D]. 孫圣福.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號(hào)：2957415