乳酸菌作為益生菌成員,其活菌以及代謝產(chǎn)物不僅具有抑菌功能,還能夠增強機體免疫,且不易產(chǎn)生耐藥性,對人畜無毒副作用。乳酸菌被確認(rèn)為是健康陰道微生物菌群中的優(yōu)勢物種,缺乏乳酸菌被認(rèn)為會破壞陰道微生物菌群平衡,降低免疫屏障功能,繼而引發(fā)各種生殖道炎癥,寄生蟲病以及真菌、衣原體的感染等。本研究從健康奶牛陰道內(nèi)分離、純化并篩選出無芽孢無莢膜且形體正常、菌體染色呈革蘭氏陽性,菌落形態(tài)、菌體特征以及生長特性具有傳代穩(wěn)定性的、同時具有益生特性的優(yōu)勢乳酸菌。在此基礎(chǔ)上,對其抗菌作用、抗菌成分進行了研究,探討了SQ0048對TLRs介導(dǎo)的MyD88/NF-KB信號通路的影響。以期為制備治療奶牛陰道炎癥的微生態(tài)制劑提供試驗依據(jù)和奠定理論基礎(chǔ)。具體研究內(nèi)容如下:1.為了獲得能夠防治奶牛生殖道炎的益生乳酸菌菌株,采用微生物學(xué)方法,對50例健康奶牛陰道菌群進行了初步分離;分別采用發(fā)酵工程學(xué)技術(shù)、顯微鏡檢查法、革蘭氏染色法及酸度測定方法,測定了初步分離乳酸菌的傳代穩(wěn)定性、染色特性、分類及產(chǎn)酸性能;分別采用顯微鏡檢查法、生化鑒定法和分子生物學(xué)方法,對初步篩選出的8株益生乳酸菌進行了形態(tài)學(xué)鑒定、生理生化特性及16srD... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：165 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 乳酸菌益生作用及其機制的研究進展
        1.1.1 抑制病原菌作用及其機制
        1.1.2 抗氧化功能
        1.1.3 免疫調(diào)節(jié)功能
    1.2 乳酸菌在動物疾病防治中的研究進展
        1.2.1 乳酸菌在豬、雞、犬等疾病防治中的研究進展
        1.2.2 乳酸菌在奶牛疾病防治中的研究進展
    1.3 乳酸菌與TLR相互作用的研究進展
        1.3.1 乳酸菌與TLR2和TLR4相關(guān)研究
        1.3.2 乳酸菌對TLRs介導(dǎo)的NF-κB信號途徑的調(diào)節(jié)研究進展
        1.3.3 乳酸菌對TLRs介導(dǎo)的NF-κB信號途徑相關(guān)細(xì)胞因子的研究進展
    1.4 研究目的與意義
2 奶牛陰道乳酸菌的分離鑒定及生物學(xué)特性研究
    2.1 試驗材料
        2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株、質(zhì)控菌株
        2.1.2 藥品與試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 儀器與設(shè)備
        2.1.5 采集地點、采集時間及試驗樣本
    2.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    2.3 研究內(nèi)容與方法
        2.3.1 樣品采集
        2.3.2 乳酸菌菌株的分離與純化
        2.3.3 奶牛陰道內(nèi)優(yōu)勢乳酸菌的初步篩選
        2.3.4 奶牛陰道內(nèi)優(yōu)勢乳酸菌菌株的鑒定
        2.3.5 奶牛陰道優(yōu)勢益生乳酸菌菌株的復(fù)篩研究
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 健康奶牛陰道內(nèi)乳酸菌的分離、純化結(jié)果
        2.4.2 健康奶牛陰道內(nèi)乳酸菌的初篩結(jié)果
        2.4.3 奶牛陰道內(nèi)乳酸菌的鑒定結(jié)果
        2.4.4 奶牛陰道益生乳酸菌菌株的復(fù)篩結(jié)果
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
3 分離優(yōu)勢乳酸菌抗菌成分及其抗菌作用的研究
    3.1 試驗材料
        3.1.1 菌種
        3.1.2 藥品與試劑
        3.1.3 培養(yǎng)基
        3.1.4 主要儀器設(shè)備
    3.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    3.3 研究內(nèi)容與方法
        3.3.1 SQ0048及SQ0054菌株抗菌成分抗菌肽的制備
        3.3.2 分離優(yōu)勢乳酸菌抗菌成分表達(dá)物的檢測
        3.3.3 SQ0048及SQ0054菌株與其抗菌肽基因表達(dá)物的抗菌活性比較研究
    3.4 試驗結(jié)果
        3.4.1 SQ0048及SQ0054菌株抗菌成分的研究
        3.4.2 抗菌肽基因表達(dá)物的檢測
        3.4.3 SQ0048及SQ0054菌株與其抗菌肽基因表達(dá)物的抗菌活性比較研究結(jié)果
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
4 SQ0048乳酸菌對TLRs介導(dǎo)的MyD88-NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響
    4.1 試驗材料
        4.1.1 試驗用菌種
        4.1.2 陰道組織樣本
        4.1.3 藥品與試劑
        4.1.4 主要儀器設(shè)備
    4.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    4.3 研究內(nèi)容與方法
        4.3.1 奶牛陰道上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)鑒定
        4.3.2 奶牛陰道上皮細(xì)胞的生物學(xué)特性研究
        4.3.3 SQ0048影響奶牛陰道上皮細(xì)胞IL-1β表達(dá)的量效及時效關(guān)系測定
        4.3.4 TLRs-MyD88/NF-κB信號通路中各抑制劑抑制效應(yīng)的時效、量效關(guān)系分析
        4.3.5 TLRs-MyD88/NF-κB信號通路中各種抑制劑及SQ0048菌株對奶牛陰道上皮細(xì)胞的毒性試驗
        4.3.6 SQ0048菌株對奶牛陰道上皮細(xì)胞中TLRs-MyD88/NF-κB信號通路的影響
    4.4 試驗結(jié)果
        4.4.1 奶牛陰道上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及純化研究
        4.4.2 奶牛陰道上皮細(xì)胞的鑒定
        4.4.3 奶牛陰道上皮細(xì)胞純度測定結(jié)果
        4.4.4 奶牛陰道上皮細(xì)胞的生長特性研究
        4.4.5 SQ0048菌株影響奶牛陰道上皮細(xì)胞IL-1β表達(dá)的量效及時效關(guān)系測定結(jié)果
        4.4.6 TLRs-MyD88/NF-κB信號通路中各抑制劑抑制效應(yīng)的時效、量效關(guān)系分析結(jié)果
        4.4.7 SQ0048菌株及各抑制劑對奶牛陰道上皮細(xì)胞的毒性試驗結(jié)果
        4.4.8 SQ0048菌株對奶牛陰道上皮細(xì)胞中TLRs-MyD88/NF-KB信號通路的影響結(jié)果
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
5 全文討論
6 全文結(jié)論
7 創(chuàng)新點
致謝
參考文獻
附錄
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]2株分離乳酸菌對奶牛陰道上皮細(xì)胞的黏附作用[J]. 牛春宇,程超,王瀟,劉彥民,黃少磊,李培鋒.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2018(12)
[2]抑郁癥患者血清TNF-α、IL-8、ICAM-1、NF-κB水平及其意義[J]. 陸梅娟,莫亞莉.  中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2018(32)
[3]AhR調(diào)控炎性細(xì)胞因子的研究進展[J]. 朱俊宇,范霞,梁華平.  免疫學(xué)雜志. 2017(01)
[4]產(chǎn)過氧化氫酶的乳酸菌的篩選和產(chǎn)酶條件的研究[J]. 唐丹玲,唐文勝.  食品與發(fā)酵工業(yè). 1992(06)



本文編號：2954108