為了探討AMPK信號通路在蛋雞原代肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝中的作用。通過改良原位二步灌流法獲得了高活性雞原代肝細(xì)胞,然后參照非酒精性脂肪肝體外建模方法,使用脂肪酸（油酸:棕櫚酸為2:1）處理肝細(xì)胞建立脂肪變性模型,分為正常肝細(xì)胞組（Control組）,正常肝細(xì)胞+AICAR組（Con+AICAR組）,正常肝細(xì)胞+Compoud C組（Control+Comp C組）,脂肪變性肝細(xì)胞組（FFA組）,脂肪變性肝細(xì)胞+AICAR組（FFA+AICAR組）,脂肪變性肝細(xì)胞+compound C組（FFA+comp C）六組。用AMPK的激活劑AICAR和抑制劑Compoud C分別對正常肝細(xì)胞和脂肪變性肝細(xì)胞進(jìn)行處理,測定各組肝細(xì)胞中血脂四項（甘油三酯TG,總膽固醇TC,低密度脂蛋白LDL-ch,高密度脂蛋白HDL-ch）含量,以及AMPK信號通路相關(guān)基因和脂質(zhì)膽固醇相關(guān)基因（AMPKαl,LKBI,ACC;FAS,HNF4α,HMGR,PPARα;CPTI,GAPT）mRNA表達(dá)量差異。結(jié)果如下:1.完善原代蛋雞肝細(xì)胞培養(yǎng)體系,培養(yǎng)的原代雞肝細(xì)胞胞核清晰,培養(yǎng)24 h細(xì)胞分化完成,細(xì)胞活力指數(shù)高。2.... 

【文章來源】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1.1 蛋雞脂肪出血綜合征疾病（FLHS）
    1.2 AMPK及其信號通路
        1.2.1 AMPK激活s劑AICAR
        1.2.2 AMPK抑制劑Compoud C
    1.3 AMPK與雞肝臟中的脂質(zhì)代謝和膽固醇合成潛在關(guān)系
        1.3.1 蛋雞出血綜合征體內(nèi)模型建立
        1.3.2 脂肪變性肝細(xì)胞體外模型建立
    1.4 研究目的及意義
第二部分 試驗研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗動物和飼養(yǎng)管理
        2.1.2 主要試劑和藥品
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 溶液配制:
        2.1.5 原代蛋雞肝細(xì)胞培養(yǎng)
            2.1.5.1 技術(shù)路線
            2.1.5.2 原位二步灌流法提取肝細(xì)胞
        2.1.6 蛋雞脂肪變性模型（FFA模型）建立
            2.1.6.1 技術(shù)路線:
            2.1.6.2 建立油酸/棕櫚酸FFA致成年蛋雞肝細(xì)胞脂肪變性模型
            2.1.6.3 鑒定蛋雞肝細(xì)胞脂肪變性模型構(gòu)建
        2.1.7 AICAR和Compoud C在原代成年蛋雞肝細(xì)胞中激活和抑制有效時長
        2.1.8 AMPK信號通路在蛋雞原代肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝中的作用
        2.1.9 AMPK激活劑AICAR和抑制劑Compound C對蛋雞原代肝細(xì)胞相關(guān)脂質(zhì)代謝膽固醇合成基因表達(dá)的影響
            2.1.9.1 成年蛋雞肝細(xì)胞總RNA的提�。═rizol法）
            2.1.9.2 RNA逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)
            2.1.9.3 引物設(shè)計與合成
            2.1.9.4 SYBR Green RT-PCR反應(yīng)
            2.1.9.5 結(jié)果統(tǒng)計
        2.1.10 數(shù)據(jù)處理
    2.2 結(jié)果分析
        2.2.1 成年蛋雞原代肝細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        2.2.2 AMPK激活劑AICAR和抑制劑Compound C在蛋雞原代肝細(xì)胞中激活和抑制最佳作用時間
        2.2.3 蛋雞原代肝細(xì)胞脂肪變性模型（Free fatty acid,FFA模型）建立
            2.2.3.1 成年蛋雞肝細(xì)胞細(xì)胞活性
            2.2.3.2 蛋雞肝細(xì)胞脂肪變性（FFA）模型油紅O染色鑒定
            2.2.3.3 蛋雞肝細(xì)胞脂肪變性（FFA）模型油紅定量鑒定
        2.2.4 AMPK激活劑AICAR和抑制劑Compound C對蛋雞原代肝細(xì)胞脂肪變性模型中細(xì)胞的脂質(zhì)代謝影響
            2.2.4.1 蛋雞肝細(xì)胞內(nèi)低密度脂蛋白濃度
            2.2.4.2 蛋雞肝細(xì)胞內(nèi)高密度脂蛋白濃度
            2.2.4.3 蛋雞細(xì)胞內(nèi)總膽固醇（TC）濃度
            2.2.4.4 蛋雞肝細(xì)胞內(nèi)甘油三脂（TG）濃度
        2.2.5 AMPK激活劑AICAR和抑制劑Compound C對蛋雞原代肝細(xì)胞脂肪變性模型中細(xì)胞相關(guān)脂質(zhì)代謝和膽固醇mRNA相對表達(dá)變化
            2.2.5.1 蛋雞肝細(xì)胞提取RNA質(zhì)量和純度
            2.2.5.2 蛋雞肝細(xì)胞中LKB1mRNA表達(dá)變化
            2.2.5.3 蛋雞肝細(xì)胞中AMPKα1mRNA表達(dá)變化
            2.2.5.4 蛋雞肝細(xì)胞中ACCmRNA表達(dá)量變化
            2.2.5.5 蛋雞肝細(xì)胞中CPT1mRNA表達(dá)量變化
            2.2.5.6 蛋雞肝細(xì)胞中HMGR mRNA表達(dá)量變化
            2.2.5.7 蛋雞肝細(xì)胞中GAPTmRNA表達(dá)量變化
            2.2.5.8 蛋雞肝細(xì)胞中FAS mRNA表達(dá)量變化
            2.2.5.9 蛋雞肝細(xì)胞中PPARα mRNA表達(dá)量變化
            2.2.5.10 蛋雞肝細(xì)胞中HNF4α mRNA表達(dá)量變化
    2.3 討論
        2.3.1 蛋雞肝細(xì)胞脂肪變性模型的建立
        2.3.2 AMPK活性變化與成年蛋雞肝細(xì)胞生化指標(biāo)的關(guān)系
        2.3.3 蛋雞肝細(xì)胞對AMPK信號通路相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響
        2.3.4 蛋雞脂肪變肝細(xì)胞對脂肪酸氧化相關(guān)基因的影響
        2.3.5 蛋雞脂肪變肝細(xì)胞對膽固醇合成相關(guān)基因的影響
第三部分 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]靶向高密度脂蛋白的動脈粥樣硬化防治研究:從升高水平到改善功能[J]. 李者龍,侯廣立,袁麗君.  心臟雜志. 2019(02)
[2]野艾蒿總黃酮的提取及其對HepG2細(xì)胞脂代謝影響的藥效學(xué)研究[J]. 李洋,周成江.  包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2018(06)
[3]雞原代肝細(xì)胞培養(yǎng)及葉酸對脂質(zhì)代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響[J]. 劉艷利,黨燕娜,段玉蘭,楊小軍.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(21)
[4]甘油三酯與高密度脂蛋白膽固醇比值和谷氨酰轉(zhuǎn)移酶對非酒精性脂肪肝的預(yù)測價值[J]. 林仿,任躍忠,褚建平,周瓊.  中華全科醫(yī)學(xué). 2017(07)
[5]斑馬魚血管內(nèi)脂代謝研究方法的構(gòu)建[J]. 陳侃,王長謙,范虞琪,韓志華,汪月,高霖,曾華盨.  中國動脈硬化雜志. 2017(04)
[6]三種不同脂肪染色方法的比較[J]. 陳敬文,游淑源,王天媧,金洪濤,羅金風(fēng).  中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志. 2016(03)
[7]低蛋白高能量日糧:導(dǎo)致籠養(yǎng)白來航蛋雞脂肪肝出血綜合癥的可能原因[J]. 王爽.  廣東飼料. 2016(04)
[8]90日齡蛋雞發(fā)生脂肪肝綜合征的病例診斷[J]. 汪德生,彭曉軍.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2015(08)
[9]Systems biology approaches for studying the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease[J]. Ciarán P Fisher,Andrzej M Kierzek,Nick J Plant,J Bernadette Moore.  World Journal of Gastroenterology. 2014(41)
[10]肝細(xì)胞脂肪變性模型中Sec61α的表達(dá)及可能作用機制[J]. 王軍,黃殿靜,賴姝婕,熊吉,魏艷玲,李青,李硯,陳瀟迪,王斌,陳東風(fēng).  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2014(08)

博士論文
[1]高脂日糧誘導(dǎo)的雞脂肪肝表型遺傳的分子機制[D]. 張永宏.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2018
[2]白藜蘆醇對HepG2細(xì)胞的影響及機制探討[D]. 胡超.中南大學(xué) 2012
[3]鵝脂肪代謝基因多態(tài)性與屠宰性狀的相關(guān)分析及其組織表達(dá)差異研究[D]. 吳華莉.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[4]AMPK對產(chǎn)蛋雞膽固醇代謝的調(diào)節(jié)作用[D]. 陳曉春.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006

碩士論文
[1]AMPK信號通路與高能低蛋白日糧致蛋雞FLHS的關(guān)系研究[D]. 高曉娜.江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]Mst1在白藜蘆醇抑制動脈粥樣硬化進(jìn)展中的作用機制研究[D]. 段宇.第四軍醫(yī)大學(xué) 2017
[3]吡咯喹啉醌鈉（PQQ.Na2）對蛋雞脂肪肝的調(diào)控作用[D]. 趙芹.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[4]PPARs及其靶向基因在雌激素誘發(fā)蛋雞脂肪肝出血綜合征中的作用研究[D]. 陳焱.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013
[5]芥菜籽在保護(hù)肝臟脂肪樣變中的作用機制[D]. 李新艷.南方醫(yī)科大學(xué) 2013
[6]廣西桂香雞適宜日糧能量蛋白水平研究[D]. 許晟瑋.廣西大學(xué) 2012
[7]糖皮質(zhì)激素和熱應(yīng)激對蛋雞肝臟脂肪代謝影響[D]. 李艷.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[8]脂肪細(xì)胞與原代肝細(xì)胞共培養(yǎng)可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞在細(xì)胞水平上發(fā)生胰島素抵抗[D]. 張日華.南京醫(yī)科大學(xué) 2007
[9]糖皮質(zhì)激素對大鼠原代肝細(xì)胞糖原代謝的雙向調(diào)節(jié)作用[D]. 鄭興鋒.第二軍醫(yī)大學(xué) 2007
[10]油酸誘導(dǎo)的脂肪肝離體細(xì)胞模型中葡萄糖轉(zhuǎn)運體Ⅱ表達(dá)變化及意義[D]. 李懿.四川大學(xué) 2004



本文編號：2953985