發(fā)布時(shí)間：2021-01-02 04:43

　　豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的,以母豬繁殖障礙和各年齡豬呼吸困難為特征的疫病。2006年,我國(guó)爆發(fā)高致病性PRRS（highly pathogenic PRRS,HP-PRRS）,對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,其危害一直持續(xù)至今。2015年甘肅武威某豬場(chǎng)發(fā)生典型的PRRS癥狀,我們對(duì)采集的病料進(jìn)行了病毒分離與鑒定。通過(guò)Marc-145細(xì)胞分離病毒,RT-PCR和N蛋白間接免疫熒光檢測(cè)確定為PRRSV感染陽(yáng)性。隨后測(cè)定了PRRSV GSWW株全基因組序列,并與國(guó)內(nèi)外參考毒株比對(duì)分析。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明,GSWW株屬于第Ⅲ亞群,于nsp2編碼區(qū)存在30個(gè)氨基酸的不連續(xù)缺失。GP5蛋白主要中和抗原表位氨基酸突變,中和表位附近出現(xiàn)新的糖基化位點(diǎn)N34。因此,GSWW分離株是我國(guó)流行的高致病性毒株。為了進(jìn)一步研究GSWW分離株的致病性和免疫學(xué)特性,我們選取了24頭PRRSV陰性豬進(jìn)行感染試驗(yàn),其中17頭以108拷貝數(shù)病毒量鼻腔攻毒,7頭進(jìn)行同居感染。攻毒與同... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 PRRS概述
    1.2 PRRSV基因組結(jié)構(gòu)及編碼蛋白
    1.3 PRRSV遺傳變異
    1.4 PRRSV感染性克隆構(gòu)建
    1.5 PRRSV感染性克隆基因操作
    1.6 PRRSV感染性克隆的應(yīng)用
        1.6.1 嵌合病毒和病毒的細(xì)胞嗜性與表型研究
        1.6.2 新型PRRS疫苗研究
        1.6.3 PRRSV外源基因表達(dá)載體
        1.6.4 PRRSV結(jié)構(gòu)和功能研究
    1.7 PRRSV免疫學(xué)特性
    1.8 PRRSV在中國(guó)的控制
    1.9 本研究的目的和意義
第二章 PRRSV GSWW株分離鑒定與遺傳變異分析
    2.1 材料和方法
        2.1.1 試劑和細(xì)胞
        2.1.2 儀器設(shè)備
        2.1.3 病料采集
        2.1.4 病原檢測(cè)
        2.1.5 PRRSV全基因組序列測(cè)定
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 細(xì)胞病變（CPE）觀察
        2.2.2 RT-PCR檢測(cè)
        2.2.3 PRRSV N蛋白間接免疫熒光檢測(cè)
        2.2.4 GSWW全基因組序列擴(kuò)增
        2.2.5 PRRSV遺傳變異分析
    2.3 討論
第三章 PRRSV GSWW株攻毒感染試驗(yàn)
    3.1 材料和方法
        3.1.1 病毒、試劑及儀器
        3.1.2 動(dòng)物試驗(yàn)
        3.1.3 臨床癥狀及病理學(xué)觀察
        3.1.4 熒光定量PCR檢測(cè)
        3.1.5 ELISA檢測(cè)PRRSV N蛋白抗體
        3.1.6 ELISA檢測(cè) γ 干擾素
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 臨床癥狀
        3.2.2 病毒血癥
        3.2.3 PRRSV N蛋白抗體
        3.2.4 γ干擾素檢測(cè)
    3.3 討論
第四章 表達(dá)FMDV B7多表位基因的重組PRRSV的拯救
    4.1 材料和方法
        4.1.1 病毒株與細(xì)胞
        4.1.2 試劑和儀器
        4.1.3 引物和表位設(shè)計(jì)
        4.1.4 重組PRRSV感染性cDNA克隆的構(gòu)建
        4.1.5 重組質(zhì)粒線性化
        4.1.6 RNA體外轉(zhuǎn)錄
        4.1.7 重組PRRSV病毒拯救
        4.1.8 RT-PCR擴(kuò)增B7多表位基因
        4.1.9 熒光定量PCR測(cè)定病毒拷貝數(shù)
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 重組PRRSV體外轉(zhuǎn)錄
        4.2.2 拯救病毒細(xì)胞病變（CPE）及綠色熒光觀察
        4.2.3 拯救病毒vFl12-B7 RT-PCR擴(kuò)增與序列測(cè)定
        4.2.4 重組PRRSV傳代穩(wěn)定性
        4.2.5 熒光定量PCR檢測(cè)重組PRRSV
    4.3 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：2952675