核定位信號(hào)肽（Nuclear localization signal,NLS）是一段由帶正電荷的堿性氨基酸及其旁側(cè)的調(diào)控元件組成的短肽,它能介導(dǎo)蛋白或核酸進(jìn)入細(xì)胞核。目前研究發(fā)現(xiàn),在生物體內(nèi)各種功能性分子中,核定位信號(hào)肽廣泛存在。蛋白分子通過(guò)核定位信號(hào)肽與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)合,穿過(guò)核孔復(fù)合體（Nuclear pore complexes,NPC）進(jìn)入出細(xì)胞核,從而完成自身結(jié)構(gòu)的修飾、折疊包裝或與特定靶分子結(jié)合,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)特定生物學(xué)信息的傳遞。PCV2 Cap蛋白是構(gòu)成PCV2核衣殼結(jié)構(gòu)的主要蛋白分子。根據(jù)研究報(bào)道,Cap蛋白N端1⁴1位氨基酸為富含精氨酸的NLS,能夠介導(dǎo)蛋白進(jìn)入細(xì)胞核,但是目前Cap蛋白進(jìn)入細(xì)胞核后是否出核以及出核的調(diào)控機(jī)制未知�；谝陨蠁�(wèn)題,我們針對(duì)PCV2 Cap蛋白進(jìn)行了如下研究:1.豬圓環(huán)病毒2d亞型病毒樣顆粒的制備與鑒定。從臨床病料中擴(kuò)增獲得PCV2 Cap基因,并進(jìn)行序列比對(duì)和抗原性分析,發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增獲得的PCV2 Cap基因?qū)儆赑CV2d亞型,在抗原性方面與國(guó)內(nèi)PCV2a、PCV2b代表性毒株、以及疫苗株之間存在4個(gè)差異部位;利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

PCV2Cap基因的擴(kuò)增100

24圖 2.2 PCV2 Cap 基因遺傳進(jìn)化分析（A）和 Cap 編碼蛋白的抗原性分析（B）◆：表示基因型代表毒株；●：表示本研究所獲得毒株；↑：抗原性不同的區(qū)Fig.2.2 Phylogenic analysis of PCV2 Cap gene (A) and antigenicity analysis of Cap proerence strains for phylogenic analysis；●：Obtained strain in this study; ↑: Antigenicity載體的構(gòu)建及鑒定 擴(kuò)增獲得 PCV2d Cap 基因，連接到 pFastBac1 載體獲得 pFastBac-Cap 重ac-Cap 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 DH10Bac 感受態(tài)細(xì)胞，獲得重組桿粒 Bacmid-Cap，經(jīng)約 0.7kb 和 2.8kb 大小的目的片段，與預(yù)期結(jié)果一致（圖 3.3）。0.850 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 2

圖 2.3 重組穿梭載體的 PCR 鑒定（A）和重組桿粒的 PCR 鑒定（B）M：DNA 分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1～4：重組 pFastBac-Cap；5～8：重組 Bacmid-CapFig. 2.3 Identification of recombinant pFastBac-Cap (A) and Bacmid-Cap (B) by PCR.M: DNA standard molecule weight; 1～4: Recombinant pFastBac-Cap; 5～8: Recombinant Bacmid-Cap.2.4 重組 PCV2d Cap 蛋白的表達(dá)提取重組桿粒 Bacmid-Cap，然后轉(zhuǎn)染 Sf9 細(xì)胞制備重組桿狀病毒，將 Cap 重組桿狀病毒 Sf9 昆蟲(chóng)細(xì)胞進(jìn)行 SDS-PAGE 電泳，同時(shí)以感染正常桿狀病毒的 Sf9 細(xì)胞和空白 Sf9 細(xì)胞照，發(fā)現(xiàn)在大約 28～30ku 處有明顯的特異性條帶（圖 2.4A）。進(jìn)一步經(jīng)抗 PCV2 Cap 蛋白隆抗體進(jìn)行 Western blot 分析，結(jié)果顯示所表達(dá)的條帶與抗 PCV2 Cap 蛋白的單克隆抗體異性反應(yīng)（圖 2.4B）。500750250100500250100

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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