目的：洛克沙腫（Rox）即3-硝基-4-羥基苯胂酸,是一種在世界范圍內(nèi)被廣泛使用的有機胂畜禽飼料添加劑。洛克沙腫在體內(nèi)吸收很少,絕大多數(shù)隨糞便排泄。畜禽糞便作為有機肥使用后,增加了環(huán)境中砷水平及人類砷污染的風(fēng)險。目前,國內(nèi)外關(guān)于洛克沙胂促血管生成的研究較少,洛克沙胂促血管生成的機制尚不明確。本文通過大鼠血管內(nèi)皮細胞生長、遷移及管形成體外試驗,以及小鼠B16F10黑色素移植瘤模型,研究洛克沙胂體內(nèi)外促血管生長中PI3K/Akt信號機制。方法：大鼠血管內(nèi)皮細胞經(jīng)不同處理后,通過MTT試驗、BrdU增殖試驗、劃痕試驗、管形成試驗,分別檢測血管內(nèi)皮細胞的活力、增殖、遷移和體外管形成能力；通過Western Blot檢測細胞中PI3K/Akt信號蛋白和VEGF的表達。不同處理分組如下：空白對照組（PBS）、陽性對照組（10 ng/mL VEGF）,洛克沙胂處理組（0.1 μmol/L、1.0 μmol/L和10.0 μmol/L Rox）,P13K抑制劑處理組（20.0 μmol/L LY294002）和共處理組（20.0 μmol/L LY294002+1.0μmol/L Rox）。在小鼠黑色... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３?Ａｋｔ信號的調(diào)控ＰＩ??細胞接受刺激或ＰＩＰ３生成之后，Ａｋｔ的ＰＨ結(jié)構(gòu)域與ＰＩＰ３相互作用，易位于細胞膜

?接種于９６孔板內(nèi)６?ｈ后可Ｗ完全貼壁，Ｗ該時間點的細胞活力作為對照。１．０叫ｌｏｌ／Ｌ洛克??沙腫處理不同時間，對內(nèi)皮細胞活為的影響見圖４Ａ。１２?ｈ、２４?ｈ和３６?ｈ這王個時間點的??細胞活力均顯著高于６ｈ的細胞活力（戶；?１２?ｈ的細胞活力與２４?ｈ的細胞活力無??顯著性差異（Ｆ＞０．Ｍ）；而３６ｈ的細胞活力顯著大于２４ｈ的細胞活為（戶＜０．０／）。??內(nèi)皮細胞經(jīng)過不同藥物或試劑處理２４?ｈ，ＭＴＴ法檢測細胞活力見圖４Ｂ。相對于空白??對照組，ＶＥＧＦ作為陽性對照，能夠顯著增強內(nèi)皮細胞的活力）?！?１．０叫ｌｏｌ／Ｌ??洛克沙腫處理也表現(xiàn)出增強內(nèi)皮細胞活力的作用（尸＜０．０５?）；?０．１?｜１〇１〇１／１＾和１０．０?＾ｔｍｏｌ??洛克沙腫處理組相對ＯＤ值均高于對照組，但差異不顯著。ＬＹ２９４００２處理組相對ＯＤ值??比空白對照組低，差異思著（），而共處理組相對〇〇值與１．０?＾〇１１〇１／１＾各克沙胖??處理組相比，呈現(xiàn)極顯著的降低）。??Ａ?Ｂ?，??２。１?Ｔ?１４－?＊?Ｔ?王??§?１．５．?早?ＩＩ?麗?§?Ｔ?南?王??１?院霞３圍?１?．難緩圍?Ｊ?Ｘ患??ｏＪｉ?Ｉ?ｉｉｉｉｌ?ｉｌｌ?ｉｌｌ?ｐ－ｓｊＭ?ｙ?擊?ｉｌ．ｉｌ?闡?Ｂ?擊．??於辦廬魯?於、決＼冷＼／、放、炎、次、??Ｒｏｘａｒｓｏｎｃ?ＬＹ２９４００２??圖４不同處理對大鼠內(nèi)皮細胞活力的影響??各組ＯＤ值數(shù)據(jù)均先與對照組的平均值相比，數(shù)據(jù)最終Ｗ比值的ｍｅａｎｉＳＤ表示。Ａ為ｌ．Ｏｎｍｏｌ／ＬＲｏｘ??處理不同時間血管內(nèi)皮細胞的巧對活力

＊?？?＜＂０．?Ｍ?ＶＳ?Ｃｏｎ仕〇��；?＃＃?尸?＜０．?口／?ＶＳ?１．０?｜ｉｍｏｌ／Ｌ?Ｒｏｘ。??２．２對內(nèi)皮細胞増殖能力的影響??圖５Ａ所示為血管內(nèi)皮細胞ＢｒｄＵ英光染色圖像，ＢｒｄＵ陽性細胞核呈現(xiàn)綠色蒙光。陽??性細胞核計數(shù)結(jié)果見圖５Ｂ。與空白對照組相比，陽性對照組血管內(nèi)皮細胞增殖活為極顯??著増強（）?；?ｌ－Ｏ＾ｍｏｌ／Ｌ洛克沙腫處理提高了血管內(nèi)皮細胞的增殖能力，與空白??對照組相比，差異具有顯著性），０．１?＾ｍｏｌ／Ｌ洛克沙腫處理后陽性細胞核數(shù)目??多于空白對照組，但差異不顯著（），１０．０叫ｎｏｌ／Ｌ洛克沙腫處理后陽性細胞核??數(shù)目低于空白對照組，但差異無顯著性（Ｐ＞０．Ｍ）。與空白對照組相比，抑制組血管內(nèi)??

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本文編號：2939712