沙門(mén)氏菌能夠通過(guò)Ⅲ型分泌系統(tǒng)（Type III secretion systems,T3SS）分泌細(xì)菌蛋白（效應(yīng)蛋白）到宿主細(xì)胞里,從而調(diào)控宿主一系列生理功能。沙門(mén)氏菌有兩種不同的T3SS,分別為由毒力島（Salmonella pathogenicity islands,SPI）-1編碼的T3SS-1和由SPI-2編碼的T3SS-2。泛素化作為蛋白翻譯后的一種修飾方式,在抵抗細(xì)菌感染時(shí)發(fā)揮重要作用,然而細(xì)菌也能夠利用T3SS分泌系統(tǒng),通過(guò)各種泛素途徑對(duì)宿主進(jìn)行瞬時(shí)和空間調(diào)控。有文獻(xiàn)報(bào)道,細(xì)菌可以通過(guò)含有LRR結(jié)構(gòu)域的E3泛素連接酶調(diào)控宿主的天然免疫反應(yīng)。如福氏志賀菌IpaH9.8通過(guò)泛素化降解NEMO,從而抑制NF-κB信號(hào)通路的激活;IpaH4.5通過(guò)泛素化降解TBK1,從而抑制IRF3的磷酸化、入核及IFN的產(chǎn)生。沙門(mén)氏菌E3泛素連接酶SspH2和SlrP也具有LRR結(jié)構(gòu)域,然而目前并沒(méi)有研究報(bào)道SspH2和SlrP在IFN信號(hào)通路中的作用。為研究沙門(mén)氏菌E3泛素連接酶SspH2和SlrP在IFN信號(hào)通路中的作用,本研究首先篩選到一株能正常編碼并表達(dá)SspH2和SlrP蛋白的沙門(mén)氏... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 沙門(mén)氏菌微生物學(xué)特性
        1.1.1 沙門(mén)氏菌的流行狀況及臨床特征
        1.1.2 沙門(mén)氏菌的血清型
        1.1.3 沙門(mén)氏菌的致病機(jī)制
    1.2 I型 IFN的產(chǎn)生及其調(diào)控機(jī)制
        1.2.1 I型 IFN
        1.2.2 I型 IFN信號(hào)通路
        1.2.3 沙門(mén)氏菌感染時(shí)產(chǎn)生的I型 IFN
    1.3 細(xì)菌E3泛素連接酶蛋白
        1.3.1 不同細(xì)菌E3 泛素連接酶蛋白調(diào)控天然免疫的研究進(jìn)展
        1.3.2 沙門(mén)氏菌E3 泛素連接酶蛋白調(diào)控天然免疫的研究進(jìn)展
    1.4 本研究的目的與意義
第二章 沙門(mén)氏菌E3 泛素連接酶SspH2和SlrP調(diào)控I型 IFN信號(hào)通路的研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株、細(xì)胞株和質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑和抗體
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 主要試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 全基因組測(cè)序
        2.2.2 細(xì)菌DNA的提取
        2.2.3 原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.4 原核質(zhì)粒表達(dá)和蛋白純化
        2.2.5 多抗的制備及檢測(cè)
        2.2.6 ssph2和slrP基因缺失株的構(gòu)建
        2.2.7 野生菌與基因缺失株生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
        2.2.8 真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和轉(zhuǎn)染
        2.2.9 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)試驗(yàn)
        2.2.10 Western blotting檢測(cè)
        2.2.11 免疫共沉淀試驗(yàn)
        2.2.12 細(xì)菌侵染細(xì)胞試驗(yàn)
        2.2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 全基因組測(cè)序結(jié)果
        2.3.2 SspH2、SlrP原核表達(dá)和蛋白純化
        2.3.3 多抗識(shí)別外源性和內(nèi)源性表達(dá)的SspH2、SlrP蛋白
        2.3.4 ssph2和slrP基因缺失株的構(gòu)建及鑒定
            2.3.4.1 PCR鑒定ssph2和slrP基因缺失株構(gòu)建成功
            2.3.4.2 Western blotting鑒定ssph2和slrP基因缺失株構(gòu)建成功
        2.3.5 ssph2和slrP基因缺失不影響沙門(mén)氏菌的生長(zhǎng)
        2.3.6 SspH2 抑制I型 IFN信號(hào)通路
            2.3.6.1 SspH2 抑制IFN和 ISRE啟動(dòng)子活性
            2.3.6.2 SspH2 與干擾素調(diào)控因子IRF3 相互作用
            2.3.6.3 SspH2 增強(qiáng)IRF3 的泛素化
            2.3.6.4 SspH2 影響IRF3 的表達(dá)
        2.3.7 SlrP不影響I型 IFN信號(hào)通路
            2.3.7.1 SlrP與天然免疫關(guān)鍵分子MDA5、RIG-I、MAVS、TANK等相互作用
            2.3.7.2 SlrP不影響IFN和 ISRE啟動(dòng)子活性
            2.3.7.3 SlrP對(duì) IRF3 的表達(dá)無(wú)影響
    2.4 討論
第三章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
    1.CVCC542和CVCC542Δssph2菌株的ssph2核酸序列比對(duì)結(jié)果
    2.CVCC542和CVCC542ΔslrP菌株的slrP核酸序列比對(duì)結(jié)果
致謝
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]沙門(mén)菌致病島2Ⅲ型分泌系統(tǒng)研究進(jìn)展[J]. 殷俊磊,李求春,焦新安.  微生物學(xué)報(bào). 2016(04)



本文編號(hào)：2928429