SIRT6是Sirtuin家族中的一員,具有去乙�；富钚院蛦蜛DP核糖基轉移酶活性。在人和小鼠上的研究表明SIRT6是細胞及個體上調控衰老及壽命的關鍵基因,參與端粒維護、DNA損傷修復、糖代謝、脂代謝等多項生理活動。但目前尚未有關于水牛SIRT6基因功能的報道。本研究對SIRT6在水牛成纖維細胞衰老上的功能及作用進行了初步探討,為水牛供體的選擇與培養(yǎng),水牛及相關大型動物基因保護,衰老機制的探討等,提供實驗基礎以及理論依據。實驗首先克隆了水牛SIRT6基因編碼區(qū),探討不同年齡水牛成纖維細胞的增殖、衰老表型、DNA損傷位點和SIRT6基因相對表達量等差異。結果表明,獲得水牛SIRT6基因編碼區(qū)序列全長1080bp,可編碼359個氨基酸,其中亮氨酸及脯氨酸含量（10.3%）最高,酪氨酸含量（1.1%）最低。水牛SIRT6核酸序列與牛,人序列相似性分別為98.4%,85.9%,含有Sirtuin家族特有的Sir2去乙�；傅拇呋Y構;通過對水牛SIRT6組織表達譜分析,結果表明SIRT6在心、肝、脾、肺、腎、腸、胃、腦、生殖嵴、皮膚中均有表達,生殖嵴中表達量最高,皮膚與心臟次之,在肝臟中表達... 

【文章來源】：廣西大學廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數】：85 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２水牛ＳＩＲＴ６基因特異性擴增??Ｆｉｇ．?１－２?Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳＩＲＴ６?ｇｅｎｅ?ｉｎ?ｂｕｆｆａｌｏ??

Ａ?Ｂ??圖１－２水牛ＳＩＲＴ６基因特異性擴增??Ｆｉｇ．?１－２?Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳＩＲＴ６?ｇｅｎｅ?ｉｎ?ｂｕｆｆａｌｏ??Ａ：水牛皮膚組織ＲＮＡ的特異性條帶；Ｂ：?Ｍｌ?Ｍａｋｅｒ?ＩＩＩ，?１水牛ＳＩＲＴ６擴增產物??Ａ：?Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｂａｎｄｓ?ｏｆ?ＲＮＡ?ｉｎ?Ｂｕｆｆａｌｏ?ｓｋｉｎ?ｔｉｓｓｕｅ；?Ｂ：Ｍ１?Ｍａｒｋｅｒ?ＩＩＩ，?１?ｂｕｆｆａｌｏ?ＳＩＲＴ６?ｇｅｎｅ?ｃｄｓ??２．２?ｐＥＡＳＹ－ＳＩＲＴ６平端載體構建??將ＰＣＲ產物進行回收純化，并與ｐＥＡＳＹ－Ｂｌｕｎｔ?Ｓｉｍｐｌｅ載體連接，經過轉化、??涂板、搖菌、質粒小提后，與ｐＥＡＳＹ－ＢｌｕｎｔＳｉｍｐｌｅ空白載體進行凝膠電泳分析。??結果顯示，連接產物質粒比ｐＥＡＳＹ－ＢｌｕｎｔＳｉｍｐｌｅ空白載體大１０８０ｂｐ左右，測序??結果顯示特異性條帶為１０８０ｂｐ，表明成功擴增獲得水牛ＳＩＲＴ６基因編碼區(qū)序列。??Ｍｌ?１?２??６�。常常欤荆�???５０２６ｂｐ??３９９？ｌｉｐ???３０４９ｂｐ?——??■??圖?１－３?ｐＥＡＳＹ－ＳＩＲＴ６－Ｂｌｕｎｔ－ｓｉｎｉｐｌｅ?載體構建??Ｆｉｇ．?１－３?ｐＥＡＳＹ－ＳＩＲＴ６－Ｂｌｕｎｔ－ｓｉｍｐｌｅ?Ｆｌａｔ?ｅｎｄ?ｖｅｃｔｏｒ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ??Ｍｌ，?Ｓｕｐｅｒｃｏｌｉｅｄ?ＤＮＡ?Ｌａｄｄｅｒ?Ｍａｒｋｅｒ?；?１，空白質粒?ｐＥＡＳＹ－Ｂｌｕｎｔ－ｓｉｍｐｌｅ；?２，ｐＥＡＳＹ－ＳＩＲＴ６??Ｍｌ：?Ｓｕｐｅｒｃｏｌｉｅｄ?ＤＮＡ?Ｌａｄｄｅｒ?Ｍａｒｋｅｒ；?１

?〇?１?Ｍ￣Ｉ?［ＨＨＩ［ＨＩ—ＣＨＨ—?〇Ｃｏ－?Ｒ？ｇ？ｎ＊?－?ａ？ｍ？ｆ－Ｒ０Ｕ＜ｒ??圖１－８水牛Ｓ１ＲＴ６蛋白二級結構預測??Ｆｉｇ．?１－８?Ｔｈｅ?ｓｅｃｏｎｄａｒｙ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｂｕｆｆａｌｏ?ＳＩＲＴ６?ｐｒｏｔｅｉｎ??２．４水牛ＳＩＲＴ６在各組織中的表達差異??采集水牛胎牛各部位組織，包括心、肝、脾、肺、腎、腸、肖、腦、卞．禎嵴、??皮膚，用Ｔｒｉｚｏｌ法提取各組織ＲＮＡ，反轉為ｃＤＮＡＡｌ？進彳ｒｑＲＴ－ＰＣＲ檢測。結Ｕ示??３１??

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]DNA雙鏈斷裂修復信號通路選擇的分子機制研究[D]. 婁江曼.浙江大學 2018

碩士論文
[1]p53干擾對牛體細胞核移植早期胚胎發(fā)育的影響[D]. 李瑞哲.西北農林科技大學 2013



本文編號：2928414