SIRT6是Sirtuin家族中的一員,具有去乙�；富钚院蛦蜛DP核糖基轉(zhuǎn)移酶活性。在人和小鼠上的研究表明SIRT6是細(xì)胞及個(gè)體上調(diào)控衰老及壽命的關(guān)鍵基因,參與端粒維護(hù)、DNA損傷修復(fù)、糖代謝、脂代謝等多項(xiàng)生理活動(dòng)。但目前尚未有關(guān)于水牛SIRT6基因功能的報(bào)道。本研究對(duì)SIRT6在水牛成纖維細(xì)胞衰老上的功能及作用進(jìn)行了初步探討,為水牛供體的選擇與培養(yǎng),水牛及相關(guān)大型動(dòng)物基因保護(hù),衰老機(jī)制的探討等,提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)以及理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)首先克隆了水牛SIRT6基因編碼區(qū),探討不同年齡水牛成纖維細(xì)胞的增殖、衰老表型、DNA損傷位點(diǎn)和SIRT6基因相對(duì)表達(dá)量等差異。結(jié)果表明,獲得水牛SIRT6基因編碼區(qū)序列全長(zhǎng)1080bp,可編碼359個(gè)氨基酸,其中亮氨酸及脯氨酸含量（10.3%）最高,酪氨酸含量（1.1%）最低。水牛SIRT6核酸序列與牛,人序列相似性分別為98.4%,85.9%,含有Sirtuin家族特有的Sir2去乙�；傅拇呋Y(jié)構(gòu);通過對(duì)水牛SIRT6組織表達(dá)譜分析,結(jié)果表明SIRT6在心、肝、脾、肺、腎、腸、胃、腦、生殖嵴、皮膚中均有表達(dá),生殖嵴中表達(dá)量最高,皮膚與心臟次之,在肝臟中表達(dá)... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２水牛ＳＩＲＴ６基因特異性擴(kuò)增??Ｆｉｇ．?１－２?Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳＩＲＴ６?ｇｅｎｅ?ｉｎ?ｂｕｆｆａｌｏ??

Ａ?Ｂ??圖１－２水牛ＳＩＲＴ６基因特異性擴(kuò)增??Ｆｉｇ．?１－２?Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳＩＲＴ６?ｇｅｎｅ?ｉｎ?ｂｕｆｆａｌｏ??Ａ：水牛皮膚組織ＲＮＡ的特異性條帶；Ｂ：?Ｍｌ?Ｍａｋｅｒ?ＩＩＩ，?１水牛ＳＩＲＴ６擴(kuò)增產(chǎn)物??Ａ：?Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｂａｎｄｓ?ｏｆ?ＲＮＡ?ｉｎ?Ｂｕｆｆａｌｏ?ｓｋｉｎ?ｔｉｓｓｕｅ；?Ｂ：Ｍ１?Ｍａｒｋｅｒ?ＩＩＩ，?１?ｂｕｆｆａｌｏ?ＳＩＲＴ６?ｇｅｎｅ?ｃｄｓ??２．２?ｐＥＡＳＹ－ＳＩＲＴ６平端載體構(gòu)建??將ＰＣＲ產(chǎn)物進(jìn)行回收純化，并與ｐＥＡＳＹ－Ｂｌｕｎｔ?Ｓｉｍｐｌｅ載體連接，經(jīng)過轉(zhuǎn)化、??涂板、搖菌、質(zhì)粒小提后，與ｐＥＡＳＹ－ＢｌｕｎｔＳｉｍｐｌｅ空白載體進(jìn)行凝膠電泳分析。??結(jié)果顯示，連接產(chǎn)物質(zhì)粒比ｐＥＡＳＹ－ＢｌｕｎｔＳｉｍｐｌｅ空白載體大１０８０ｂｐ左右，測(cè)序??結(jié)果顯示特異性條帶為１０８０ｂｐ，表明成功擴(kuò)增獲得水牛ＳＩＲＴ６基因編碼區(qū)序列。??Ｍｌ?１?２??６�。常常欤荆�???５０２６ｂｐ??３９９？ｌｉｐ???３０４９ｂｐ?——??■??圖?１－３?ｐＥＡＳＹ－ＳＩＲＴ６－Ｂｌｕｎｔ－ｓｉｎｉｐｌｅ?載體構(gòu)建??Ｆｉｇ．?１－３?ｐＥＡＳＹ－ＳＩＲＴ６－Ｂｌｕｎｔ－ｓｉｍｐｌｅ?Ｆｌａｔ?ｅｎｄ?ｖｅｃｔｏｒ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ??Ｍｌ，?Ｓｕｐｅｒｃｏｌｉｅｄ?ＤＮＡ?Ｌａｄｄｅｒ?Ｍａｒｋｅｒ?；?１，空白質(zhì)粒?ｐＥＡＳＹ－Ｂｌｕｎｔ－ｓｉｍｐｌｅ；?２，ｐＥＡＳＹ－ＳＩＲＴ６??Ｍｌ：?Ｓｕｐｅｒｃｏｌｉｅｄ?ＤＮＡ?Ｌａｄｄｅｒ?Ｍａｒｋｅｒ；?１

?〇?１?Ｍ￣Ｉ?［ＨＨＩ［ＨＩ—ＣＨＨ—?〇Ｃｏ－?Ｒ？ｇ？ｎ＊?－?ａ？ｍ？ｆ－Ｒ０Ｕ＜ｒ??圖１－８水牛Ｓ１ＲＴ６蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)??Ｆｉｇ．?１－８?Ｔｈｅ?ｓｅｃｏｎｄａｒｙ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｂｕｆｆａｌｏ?ＳＩＲＴ６?ｐｒｏｔｅｉｎ??２．４水牛ＳＩＲＴ６在各組織中的表達(dá)差異??采集水牛胎牛各部位組織，包括心、肝、脾、肺、腎、腸、肖、腦、卞．禎嵴、??皮膚，用Ｔｒｉｚｏｌ法提取各組織ＲＮＡ，反轉(zhuǎn)為ｃＤＮＡＡｌ？進(jìn)彳ｒｑＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)。結(jié)Ｕ示??３１??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]端粒延長(zhǎng)替代機(jī)制與DNA修復(fù)途徑[J]. 張永進(jìn),李海麗,李翠,邵馳浩,羅瑛.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2018(08)
[2]DNA損傷修復(fù)的分子機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 宋囡,石磊.  西南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(01)
[3]細(xì)胞衰老及在個(gè)體衰老中的作用[J]. 馬少締,呂東鶴,霍健,王姍姍,樸金花.  黑龍江醫(yī)藥科學(xué). 2017(06)
[4]WRN結(jié)構(gòu)及其生物學(xué)功能研究進(jìn)展[J]. 夏旭,陳立,李燕.  生命的化學(xué). 2016(06)
[5]SIRT6的研究進(jìn)展及功能剖析[J]. 呂澤中,袁丁,張長(zhǎng)城,王婷.  生命科學(xué). 2016(11)
[6]Nucleus Transfer Efficiency of Ear Fibroblast Cells Isolated from Bama Miniature Pigs at Various Ages[J]. 王慶華,彭云,蔡信永,萬(wàn)萌,劉宇,魏泓.  Journal of Huazhong University of Science and Technology(medical Sciences). 2015(04)
[7]不同年齡大鼠成纖維細(xì)胞增殖能力和端粒長(zhǎng)度的變化[J]. 劉波,滕曉華,彭立輝,盧明,潘林香,周蓉.  醫(yī)學(xué)臨床研究. 2008(08)
[8]端粒和端粒酶的結(jié)構(gòu)與功能及其應(yīng)用[J]. 朱雅新,麻浩.  湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2005(01)

博士論文
[1]DNA雙鏈斷裂修復(fù)信號(hào)通路選擇的分子機(jī)制研究[D]. 婁江曼.浙江大學(xué) 2018

碩士論文
[1]p53干擾對(duì)牛體細(xì)胞核移植早期胚胎發(fā)育的影響[D]. 李瑞哲.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2013



本文編號(hào)：2928414