豬輪狀病毒（Porcine Rotavirus,PoRV）是引起仔豬腹瀉的重要病原之一,主要引起仔豬急性腹瀉、嘔吐、脫水。豬輪狀病毒一般不引起成年豬發(fā)病,可以使成年豬呈現(xiàn)隱性感染,持續(xù)排毒,從而導致病毒水平傳播。若與豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）以及致病性大腸桿菌混合感染會使病情加重,導致高死亡率,從而給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。A群輪狀病毒（RVA）屬于一種無囊膜包被的病毒,它由11個分節(jié)段的雙股正鏈RNA組成,分別編碼6個結構蛋白（VP1-VP4,VP6-7）和5/6個非結構蛋白（NSP1-5/6）。VP7和VP4蛋白能夠誘導產(chǎn)生血清型特異性中和抗體,在免疫保護和疫苗開發(fā)方面起重要作用,至今已在人類和動物中確立了 27個G血清型和37個P血清型。豬輪狀病毒最常見的基因型組合為G3、G4、G5、G11和P[6]、P[7]的基因型組合。先前鑒定的在豬中主要的G血清型是G3,G4,G5和G11,與之相關的P血清型是P[6]和P[7]。本研究通過構建PoRV-VP7基因在桿狀病毒表達系統(tǒng)中表達的rBacmid-PoRV-VP7融合蛋白,制備了針對rBacmid... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１最佳封閉液和最佳封閉時間的篩選??Ｆｉｇ．?３－１?Ｔｈｅ?ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｂｅｓｔ?ｂｌｏｃｋｉｎｇ?ｓｏｌｕｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｏｐｔｉｍｕｍ??

４９??分別設置封閉時間為ｌｈ、２ｈ和３ｈ采用棋盤法進行試驗，陰、陽性對照分別使用Ｓ？細??胞培養(yǎng)上清進行１：１００稀釋，各設立２個重復。結果如圖３－１所示，５％脫脂乳和８％?ＲＳ的??封閉效果相近，２％?ＢＳＡ的封閉效果最好，因此確定最佳封閉液為２％?ＢＳＡ；當以２％?ＢＳＡ??作為封閉液時，封閉時間為２ｈ時，陽性血清與陰性血清的ＯＤ４５〇ｎｍ值相差最大??（Ｐ／Ｎ＝１３．９８９）。因此，確定本研宄方法的最佳封閉液為２％ＢＳＡ，最佳封閉時間為２ｈ。??１６０００?１３．５９３?１３．９８９?１３．８３８??１４．０００?—－??１１．３３１??１２．０００?１１．４４８??１０．０００?１１了３８?＿￣???Ｍ?１０．０３０??ｚ?８．０００???２％ＢＳＡ??－６．０００?—??８％兔皿清??４．０００??２．０００??０．０００??ｌｈ?２ｈ?３ｈ?封閉時間??圖３－１最佳封閉液和最佳封閉時間的篩選??Ｆｉｇ．?３－１?Ｔｈｅ?ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｂｅｓｔ?ｂｌｏｃｋｉｎｇ?ｓｏｌｕｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｏｐｔｉｍｕｍ??３．２．３待檢血清最佳稀釋度的確定??使用上述確定條件包被并封閉酶標板，將陽性血清和陰性血清分別用ＳＳ細胞培養(yǎng)上??清按照不同稀釋度進行稀釋，每個稀釋度設置２個重復，其余步驟均按照２．２．１的ＥＬＩＳＡ??操作方法進行試驗。結果如圖３－２所示，當血清稀釋度為１：２００時，陽性血清與陰性血清??的ＯＤ４５Ｇｎ

??ＨＲＰ－羊抗豬ＩｇＧ酶標抗體反應時間??圖３－４ＨＲＰ－羊抗豬ＩｇＧ?（Ｈ＋Ｌ）最佳反應時間的確定??Ｆｉｇ．３－４?Ｔｈｅ?ｏｐｔｉｍａｌ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ?ｏｆＨＲＰ－ｇｏａｔ?ａｎｔｉ－ｐｏｒｃｉｎｅ?ＩｇＧ?（Ｈ＋Ｌ）??３．２．６底物最佳反應時間的確定??根據(jù)上述確定的條件進行ＥＬＩＳＡ實驗。待ＨＲＰ－羊抗豬ＩｇＧ酶標二抗反應結束后，??按照１００（ｘＬ／？Ｌ加入新鮮配制的商品化ＤＡＢ顯色液，顯色時間分別為１０ｍｉｎ、１５ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、??３０ｍｉｎ、４５ｍｉｎ、６０ｍｉｎ；每個顯色時間分別做２個陰、陽性豬血清的重復；然后立即用２Ｍ??Ｈ２Ｓ〇４終止反應，讀�。希模簦旦枺睿碇担Y果如圖３－５所示，當顯色時間為１５ｍｉｎ時，陽性血??清與陰性血清的ＯＤ４５〇ｎｍ值相差最大（Ｐ／Ｎ＝１４．０３６）。因此，確定最佳顯色時間為１５ｍｉｎ。??

【參考文獻】：
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本文編號：2928484