犬瘟熱是由犬瘟熱病毒（Canine distemper virus,CDV）引起的一種烈性、高度接觸性傳染病。犬瘟熱病毒屬于副粘病毒科、麻疹病毒屬,是有囊膜的單股負(fù)鏈不分節(jié)段的RNA病毒,基因組從3’端到5’端依次編碼6個結(jié)構(gòu)蛋白,其中血凝素蛋白（H）和融合蛋白（F）分別與宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜的結(jié)合和融合。病毒特異性受體在宿主細(xì)胞表面的表達(dá)是病毒侵入的首要條件,也是決定病毒組織嗜性和發(fā)病機(jī)理的重要因素。目前,CDV已知的兩種主要細(xì)胞受體分別是:信號淋巴細(xì)胞激活分子（Signaling Lymphocyte Activation Molecules,SLAM）和細(xì)胞粘附分子-4（nectin-4）,這兩種受體對CDV吸附侵入到宿主體內(nèi)起重要作用。SLAM為犬瘟熱病毒感染宿主免疫細(xì)胞的受體,其與CDV H蛋白識別是病毒致病性的基礎(chǔ)。不同動物SLAM可變區(qū)（V）氨基酸差異可影響受體與CDV H相互作用,進(jìn)而可能導(dǎo)致宿主對CDV易感性的不同。我們前期研究結(jié)果表明水貂對CDV易感性低于貉,且同一株CDV在表達(dá)貉子SLAM受體的BHK細(xì)胞上比在表達(dá)水貂SLAM受體的細(xì)胞所引起的病毒效價高,進(jìn)一步比對S... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

SLAM氨基酸序列比對及其蛋白3D結(jié)構(gòu)

圖 2. 8 種質(zhì)粒的間接免疫熒光Figure 2. Indirect immunofluorescence of different mutants)pDisplay-rSLAM (C)pDisplay-mSLAM-V74I (D)pDisplay-mSLAM-R129Q (E)pDisplayV (G)pDisplay-rSLAM-Q129R (H)pDisplay-rSLAM-I74V/Q129R (I)未轉(zhuǎn)染陰性對照)pDisplay-rSLAM (C)pDisplay-mSLAM-V74I (D)pDisplay-mSLAM-R129Q (E)pDisplayG)pDisplay-rSLAM-Q129R (H)pDisplay-rSLAM-I74V/Q129R (I) Negative control (on術(shù)定量 SLAM 表達(dá)量y-m/rSLAM 等 8 種質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染 BHK 細(xì)胞，將不同 SLAM說明書操作染色表達(dá)細(xì)胞，每種細(xì)胞取 3×104個進(jìn)行流式細(xì)性細(xì)胞比例，結(jié)果顯示八種不同的表達(dá)細(xì)胞其 SLAM 表達(dá)重復(fù)四次，進(jìn)行差異性分析，水貂 SLAM 在點(diǎn)突變前后， SLAM 表達(dá)有顯著降低，平均蛋白質(zhì)表達(dá)率從 95.6％降低至突變相比于突變前其 SLAM 表達(dá)從 95.6％降低至 93.9％，但貂 SLAM 74 和 129 位氨基酸的雙突變，使得 SLAM 表達(dá)比

圖 3. 流式細(xì)胞術(shù)定量 SLAM 表達(dá)量Figure 3. Flow cytometric quantification of SLAM expression.(A)流式細(xì)胞術(shù)檢測 SLAM 表達(dá)，從左上向右依次是陰性對照細(xì)胞(0.56%)，pDisplay-mSLAM (98.06%)、rSLAM (93.69%)、mSLAM-V74I(91.09%) 、 mSLAM-R129Q (95.07%) 、 mSLAM-V74I/R129Q (97.51%) 及 rSLAM-I74V (94.76%) 、 rSLAM-Q129R (94.35%) 、rSLAM-I74V/Q129R (92.74%) (B)流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果統(tǒng)計分析 *P<0.05，數(shù)據(jù)表示：平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(A) From top left to right: negative control cells (0.56%), pDisplay-mSLAM (98.06%), rSLAM (93.69%), mSLAM-V74I (91.09%),mSLAM-R129Q (95.07%), mSLAM-V74I/R129Q (97.51%), rSLAM-I74V (94.76%), rSLAM-Q129R (94.35%), rSLAM-I74V/Q129R (92.74%)(B) Statistical analysis of flow cytometry results; data represent mean±standard error. *P < 0.05.2.2.5 細(xì)胞融合及其 Hoechst33342 核染色結(jié)果使用 pCI-H、pCI-F 與八種不同 SLAM 表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 BHK 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染 24h 左右出現(xiàn)細(xì)胞融合（圖 4.A），轉(zhuǎn)染 48h 左右進(jìn)行細(xì)胞固定及 Hoechst33342 核染色，觀察合胞體，細(xì)胞進(jìn)行染色后，在熒光顯微鏡下成明亮藍(lán)色熒光，合胞體成聚集藍(lán)色光團(tuán)，十分明顯。觀察發(fā)現(xiàn)水貂 SLAM突變后所導(dǎo)致的細(xì)胞融合，即 mSLAM-V74I、mSLAM-R129Q、mSLAM-V74I/R129Q 所導(dǎo)致合胞體有明顯的變大、增多；而貉子突變后（rSLAM-I74V、rSLAM-Q129R、rSLAM-I74V/Q129R ）引起的細(xì)胞融合合胞體大小及數(shù)目從圖片上觀察變化不大（圖 4. B）；而單獨(dú)轉(zhuǎn)染 SLAM 質(zhì)粒、

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]犬瘟熱病毒敏感細(xì)胞系和感染性克隆的構(gòu)建與初步應(yīng)用研究[D]. 劉玉秀.吉林大學(xué) 2014



本文編號：2918770