發(fā)布時間：2020-12-14 23:35

　　奶牛子宮內(nèi)膜炎是引起奶牛不孕的一個重要原因,是奶牛養(yǎng)殖中的常見疾病,同時還會造成奶牛泌乳量的大幅減少,降低養(yǎng)殖效益,嚴重制約了奶牛業(yè)的發(fā)展。隨著抗生素的不合理使用,出現(xiàn)了很多耐藥菌株,使得由細菌感染引起的奶牛子宮內(nèi)膜炎的治療遇到了前所未有的困難。作為細菌的原始殺手,噬菌體再一次引起了人們的關注。本研究利用實驗室保存的來源于奶牛子宮內(nèi)膜炎的大腸桿菌和鏈球菌作為宿主菌,采用雙層平板法從污水中分離純化到大腸桿菌毒性噬菌體EP-CE和鏈球菌毒性噬菌體SP48,鑒定了兩株噬菌體的核酸類型,并進行了生物學特性和初步應用研究。結果表明,本研究中分離到的噬菌體EP-CE和噬菌體SP48具有很強的特異性,對乙醚和氯仿均不敏感。兩者都是雙股DNA病毒,EP-CE的基因組大于50kb,SP48的基因組大于61 kb。透射電鏡觀察噬菌體EP-CE屬于肌尾病毒科,頭部呈二十面體對稱結構,頭部長約70.9±0.35nm、寬約68.4±0.48 nm,尾部長約90.1±5.39 nm;噬菌體SP48屬于長尾病毒科,頭部呈二十面體對稱結構,頭部長約79.0±0.33 nm、寬約73±0.38 nm,尾部長約354±0... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學吉林省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

噬菌體SP48點滴法驗證Fig.1.3SpottestsofphageSP48intheliquid

鏈球菌毒性噬菌體的點滴法驗證如圖 1.3。通過多次挑取單個噬菌斑，然后層平板法對鏈球菌毒性噬菌體進行反復純化，使得噬菌斑較大、單一均勻、整齊、清晰透亮，如圖 1.4 所示，噬菌斑的直徑大約為 0.8 mm，命名為 SP48。圖 1.1 噬菌體 EP-CE 點滴法驗證Fig. 1.1 Spot tests of phage EP-CE in theliquid samples.注：鏈：擬含大腸桿菌噬菌體的原液 D：對照組圖 1.2 噬菌體 EP-CE 純化后的噬菌斑Fig. 1.2 The plaques of phage EP-CEafter purification.

結果 噬菌體的分離純化將污水和宿主菌混合培養(yǎng)，多次富集后，通過點滴法驗證，結果顯示成功了大腸桿菌毒性噬菌體和鏈球菌毒性噬菌體。大腸桿菌毒性噬菌體點滴法圖 1.1 所示：擬含噬菌體的地方出現(xiàn)了無菌區(qū)，對照組區(qū)域有細菌生長，功分離到了大腸桿菌毒性噬菌體。通過多次挑取單個噬菌斑，然后用雙層對大腸桿菌毒性噬菌體進行反復純化，使得噬菌斑較大、單一均勻、邊緣清晰透亮，如圖 1.2 所示，噬菌斑的直徑大約為 1.5 mm，命名為 EP-CE

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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