卵母細胞冷凍復(fù)蘇后的復(fù)蘇率、受精率、胚胎發(fā)育率和成活率一直不理想,導(dǎo)致這種現(xiàn)象的原因比較復(fù)雜,其中胞內(nèi)鈣離子濃度的升高可能是發(fā)育率降低的一個重要原因。為了探究細胞內(nèi)鈣離子的改變對卵母細胞造成的影響,本研究通過透射電子顯微鏡、激光掃描共聚焦顯微鏡等對冷凍前后各組卵母細胞的超微結(jié)構(gòu)、精子穿透、透明帶消化、發(fā)育率以及鈣離子濃度和波動進行研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn):（1）透射電子顯微鏡下,新鮮對照組、毒胡蘿卜素（Thapsigargin,TG）處理組、2-氨基乙氧基苯硼酸（2-Aminoethoxydiphenylborate,2-APB）處理組卵母細胞的透明帶和線粒體結(jié)構(gòu)都比較完整;而冷凍組、TG冷凍組卵母細胞的冷凍損傷較嚴重,透明帶變寬,邊緣處破損,卵周隙變寬,線粒體結(jié)構(gòu)模糊不清;2-APB冷凍組卵母細胞損傷較輕,透明帶和線粒體等細胞器結(jié)構(gòu)只有部分出現(xiàn)模糊。（2）透明帶消化時間和透明帶結(jié)合精子個數(shù):2-APB冷凍組（230.5±7.14,4.17±1.11）、TG 冷凍組（172.5±5.91,1.17± 1.03）、冷凍組（221.22±9.46,2.75±1.29）與新鮮對照組（300.14±7.... 

【文章來源】：廣西大學廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１冷凍液Ｉ丨刺激后各組鈣離子波動??ＦＩＧ．?２－１?Ｃａｌｃｉｕｍ?ｉｏｎ?ｆｌｕｃｔｕａｔｉｏｎ?ｉｎ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?ａｆｔｅｒ?ｔｈｅ?ｃｒｙｏｇｅｎｉｃ?ｌｉｑｕｉ?

將各組卵母細胞細胞進行ＩＶＦ，１６ｈ后挑選出存活良好的細胞用乙酸：乙醇（１：?３）??的溶液固定４８ｈ，４°Ｃ，取出固定好的細胞，用１％?（ｗ／ｖ）?ｏｒｃｅｉｎ染液染色５ｍｉｎ，壓片??拍照觀察（如圖３－１所示）。??ｔ??／?＼??Ｉ?１??ｉ?Ｊ??圖３－１卵母細胞結(jié)合精子個數(shù)??ＦＩＧ．?３－１?Ｔｈｅ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｏｏｃｙｔｅｓ?ｔｈａｔ?ｂｉｎｄ?ｔｏ?ｓｐｅｒｍ??表３－２胞內(nèi)鑰離子濃度的改變對玻璃化冷凍卵母細胞結(jié)合精子個數(shù)的影響??Ｔａｂｌｅ?３－２?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｃａｌｃｉｕｍ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｖｉｔｒｅｏｕｓ?ｆｒｏｚｅｎ???ｏｏｃｙｔｅ?ｃｏｍｂｉｎｅｄ?ｗｉｔｈ?ｓｐｅｒｍ?ｃｏｕｎｔ．??組別?細胞個數(shù)?結(jié)合精子??Ｇｒｏｕｐｓ?Ｃｅｌｌ?Ｔｈｅ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｓｐｅｒｍ??新鮮對照組?Ｆｒｅｓｈ?ｃｏｎｔｒｏ丨?ｇｒｏｕｐ?＾?８．００±２．４５??ＴＧ?處理組?Ｔｏｘｉｃｉｔｙ?ｏｆ?ＴＧ?ｇｒｏｕｐ?１５?７．３３±２．１３隊??２－ＡＰＢ?處埋組?Ｔｏｘｉｃｉｔｙ?ｏｆ?２－ＡＰＢ?ｇｒｏｕｐ?１５?８．７３±２．３４ａｄ??冷凍組?Ｆｒｏｚｅｎ?ｇｒｏｕｐ?１２?２＿７５±?Ｉ?＇２９ｂ??ＴＧ?冷凍組?ｆｒｏｚｅｎ?ｇｒｏｕｐ?ｏｆ?ＴＧ?丨２?Ｉ．１７±１．０３??２－ＡＰＢ?冷凍組?ｆｒｏｚｅｎ?ｇｒｏｕｐ?ｏｆ?２－ＡＰＢ?１２?４Ｊ７±Ｌ１１＇??注：同列字母不同字母為差異顯著（Ｐ＜０．０５）

圖４－１卵母細胞體外培養(yǎng)發(fā)育不同時期圖??ＦＩＧ．?４－１?Ｔｈｅ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ?ｏｆ?ｏｏｃｙｔｅ?ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｍｅｓ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ??


本文編號：2915912