本研究通過(guò)構(gòu)建體內(nèi)體外模型,綜合評(píng)價(jià)糠氨酸對(duì)HePG-2,HeK-293,CaCo-2,SK-N-SH的細(xì)胞毒性以及對(duì)小鼠的毒性作用。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1.糠氨酸對(duì)體外細(xì)胞的影響:利用CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活力,檢測(cè)結(jié)果顯示糠氨酸處理組與對(duì)照組相比細(xì)胞活力顯著下降。利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡,檢測(cè)結(jié)果顯示糠氨酸處理組細(xì)胞在S期時(shí)細(xì)胞分裂抑制,HePG-2,HeK-293細(xì)胞凋亡率升高。2.糠氨酸半數(shù)致死濃度值(LD₅₀):根據(jù)構(gòu)建急性毒性小鼠模型試驗(yàn)得到糠氨酸對(duì)小鼠半數(shù)致死濃度值(LD₅₀)為1.6g/kg。依據(jù)1/3半數(shù)致死濃度值計(jì)算慢性毒性小鼠模型中糠氨酸濃度分別為糠氨酸低劑量組（0.1g/kg）、糠氨酸中劑量組（0.25 g/kg）、糠氨酸高劑量組（0.50 g/kg）。3.糠氨酸對(duì)小鼠的毒性作用:結(jié)果1)小鼠體重變化:糠氨酸處理組小鼠體重明顯降低。2)臟器系數(shù)比值:根據(jù)小鼠臟器系數(shù)比值得出,糠氨酸處理組雌雄鼠的肝臟指數(shù)與腎臟指數(shù)明顯增大。3)血常規(guī)檢測(cè):根據(jù)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)結(jié)果顯示糠氨酸處理組,白細(xì)胞總數(shù)（WBC）增... 

【文章來(lái)源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

美拉德反應(yīng)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)

4.1 各指標(biāo)測(cè)量結(jié)果4.1.1 急性毒性試驗(yàn)結(jié)果在急性毒性模型中，連續(xù) 14 天灌胃并對(duì)小鼠觀察，試驗(yàn)第二天小鼠出現(xiàn)體重下降，出現(xiàn)腹瀉，被毛無(wú)光澤等癥狀，計(jì)算糠氨酸對(duì)小鼠半數(shù)致死濃度值（LD50）為 1.6g/kg，依據(jù) 1/3 半數(shù)致死濃度值計(jì)算亞急性毒性試驗(yàn)中糠氨酸濃度分別為0.1g/kg、0.25 g/kg、0.50 g/kg。4.1.2 糠氨酸影響 4 種細(xì)胞活力用不同濃度糠氨酸處理 Hek-293,HepG-2,SK-N-SH, Caco2 這四種細(xì)胞，結(jié)果如圖二所示，研究表明，糠氨酸處理組與對(duì)照組相比 Hek-293 細(xì)胞和 HepG-2 細(xì)胞在糠氨酸濃度為 0.2mM 時(shí)細(xì)胞活力降低（P <0.05）。而 SK-N-SH 細(xì)胞在糠氨酸濃度為 0.39mM 時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)細(xì)胞活力降低（P <0.05）。Caco-2 細(xì)胞在糠氨酸為 0.2mM開(kāi)始出現(xiàn)細(xì)胞活力降低。Hek-293 細(xì)胞和 HepG-2 細(xì)胞對(duì)糠氨酸干擾最為敏感。活細(xì)胞率 =（細(xì)胞總數(shù)-死細(xì)胞數(shù)）/ 細(xì)胞總數(shù) x 100%

4.1.4 糠氨酸誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡通過(guò) AnnexinV / PI 試劑盒利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，如圖 4 中所示，UL：偏差指控（包括機(jī)械損傷造成細(xì)胞凋亡）UL 所占比率小說(shuō)明試驗(yàn)細(xì)胞可用，試驗(yàn)過(guò)程中對(duì)細(xì)胞造成的人為性損傷比較��；UR：晚期凋亡細(xì)胞（包括壞死性細(xì)胞），UR 所占比例高表明細(xì)胞凋亡增多，細(xì)胞壞死；LR：早期凋亡細(xì)胞; LL：正�；罴�(xì)胞。通過(guò)細(xì)胞凋亡率計(jì)算得知，如圖 5 所示：（1）Hek293 細(xì)胞凋亡率：對(duì)照組細(xì)胞凋亡率為 20.64%，糠氨酸濃度在 0.2mM時(shí)細(xì)胞凋亡率為 27.58%，糠氨酸濃度在 0.79mM 時(shí)細(xì)胞凋亡率為 75.89%，高濃度的糠氨酸處理 Hek293 細(xì)胞與對(duì)照組和低濃度糠氨酸處理組相比，造成細(xì)胞凋亡明

【參考文獻(xiàn)】：
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