轉(zhuǎn)基因動物是將外源的目的基因?qū)胨拗骷毎?使外源基因穩(wěn)定的整合在宿主基因組中,并且可以隨著轉(zhuǎn)基因動物的傳代穩(wěn)定的將外源基因傳給后代。通過轉(zhuǎn)基因動物模型,研究外源基因在活體中的表達情況,進而獲得人們理想的性狀。本研究將豬肌肉特異性重組表達質(zhì)粒p GL3-Myoz1-PPAR-γ2his-Basic和p SV40-Myf6-Myo DEGFP-N1線性化后利用顯微注射技術(shù)獲得PPAR-γ2和Myo D轉(zhuǎn)基因鼠,從核酸水平、蛋白水平及活體水平等方面研究外源基因拷貝數(shù)、啟動子組織特異性、目的性狀表型等內(nèi)容,以期為轉(zhuǎn)基因豬提供有用的啟動子。主要研究成果如下:1、利用PCR技術(shù)成功鑒定出PPAR-γ2和Myo D轉(zhuǎn)基因陽性鼠及外源基因的拷貝數(shù),結(jié)果表明外源基因可以穩(wěn)定地遺傳給后代。采用實時熒光定量PCR、免疫組化和Western blot等技術(shù)證實豬肌肉組織特異性啟動子Myoz1和Myf6可以上調(diào)PPAR-γ2（p<0.01）和Myo D（p>0.05）基因的表達,并且上調(diào)PPAR-γ2下游靶基因脂肪酸結(jié)合蛋白（fatty acid-binding protein 4,FABP4）和... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

直接或間接調(diào)控PPARγ的信號因子（引自(Fernyhough2007)）

第三章 PPAR-γ2 轉(zhuǎn)基因鼠的研究結(jié)果與分析1 PPAR-γ2 陽性轉(zhuǎn)基因鼠的鑒定將實驗室保存的 PPAR-γ2 質(zhì)粒線性化后，線性化的質(zhì)粒見圖 3-1A，利用顯微注射技術(shù)制備轉(zhuǎn)基因鼠。原代的轉(zhuǎn)基因鼠首先與野生型鼠交配，獲得的 F1 代轉(zhuǎn)基因鼠，F(xiàn)1 代陽性轉(zhuǎn)基因公母鼠相互交配獲得 F2 代，同樣的交配方式直到獲得 F3 代轉(zhuǎn)基因鼠。利用 PCR 方法從 PPAR-γ2 轉(zhuǎn)基因后代鼠基因組 DNA 上擴增外源全長片段，初步鑒定陽性轉(zhuǎn)基因鼠，PCR 擴增鑒定的結(jié)果見圖 3-1B。2-22 泳道分別為 21 只轉(zhuǎn)基因后代鼠，其中 2、4、7-9、12-17、19 泳道有目的條帶，則為陽性轉(zhuǎn)基因鼠，其余泳道沒有目的條帶則為陰性鼠。但是目的條帶的亮度并不完全相同，這可能是由于有的鼠為純合子有的鼠為雜合子，并且外源基因在不同轉(zhuǎn)基因后代鼠基因組中的拷貝數(shù)也有所不同。

圖 3-2 小鼠單拷貝基因 Pthlh 部分序列 PCR 電泳圖泳道 M:DL2000；泳道 1-6:單拷貝基因 Pthlh 擴增片段Fig.3-2 PCR Products of mouse single copy gene called PthlhLaneM:DL2000；Lane1-6:Amplified subsequence fragments of Pthlh

【參考文獻】：
期刊論文
[1]反向疫苗學(xué):后基因組時代疫苗研究新途徑[J]. 胡永浩,沈正達.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2004(04)
[2]基因工程技術(shù)在反芻動物上的應(yīng)用研究[J]. 趙學(xué)軍,劉建新,吳躍明.  中國飼料. 2004(11)

碩士論文
[1]豬骨骼肌特異性表達基因myoz1/tnnc2啟動子的克隆及功能驗證[D]. 尚楊楊.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]豬肌肉/肝臟特異性表達MyoD/BGL1載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因小鼠的研究[D]. 周鵬.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]五指山豬KIT基因拷貝數(shù)檢測暨豬PSME1基因與免疫性狀關(guān)系的研究[D]. 牛玉娜.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號：2910886