脂質代謝是體內(nèi)重要且復雜的生化反應,指生物體內(nèi)脂質在各種相關酶的催化下,消化吸收、合成與分解的過程,加工成機體所需要的物質,確保正常生理機能的運作,對于生命活動具有重要意義。脂質沉積是脂質代謝中重要的一部分,涉及到諸多領域,包括畜牧行業(yè)家禽家畜的肉質。近年來,天然產(chǎn)物參與成脂調控的研究逐漸成為研究的熱點,因此本研究以3T3-L1脂肪細胞為研究對象,通過添加天然小分子龍血素B(Loureirin B),檢測其對脂肪細胞的成脂情況及其影響成脂的機制,進而探究其對脂質代謝的影響,從而為調控豬的脂肪沉積提供理論依據(jù)。本研究主要獲得以下結果:1、在3T3-L1脂肪細胞增殖期加入80μmol/L的Loureirin B處理24h,CCK-8試劑盒檢測細胞活力,結果表明80μmol/L的Loureirin B對3T3-L1脂肪細胞的活力無顯著影響;2、龍血素B(80μmol/L)對3T3-L1脂肪細胞的增殖有抑制作用。在3T3-L1脂肪細胞增殖期加入80μmol/L的Loureirin B處理48h-72h,利用EdU染色可發(fā)現(xiàn)Loureirin B處理可顯著降低細胞的數(shù)目(P0.01);RT-PCR檢測增殖相關基因的mRNA表達,Western blot檢測相關蛋白的表達水平,結果發(fā)現(xiàn)Loureirin B處理可顯著下調促增殖基因CyclinD、CyclinE的mRNA和蛋白的表達(P0.01),上調抑增殖基因的P53 mRNA水平(P0.05),與增殖有關的ERK信號通路中ERK1/2的磷酸化水平下降(P0.05);流式細胞術檢測細胞增殖周期,結果發(fā)現(xiàn)Loureirin B處理后,使S期的細胞數(shù)目減少,可使細胞的增殖周期阻滯在G2期。3、龍血素B(80μmol/L)顯著促進3T3-L1脂肪細胞的成脂與分化。在3T3-L1脂肪細胞的分化期加入80μmol/L的Loureirin B,油紅O染色發(fā)現(xiàn)與對照組相比Loureirin B能顯著促進3T3-L1脂肪細胞內(nèi)脂滴的合成;RT-PCR和Western blot檢測相關基因和蛋白表達水平。結果發(fā)現(xiàn),Loureirin B處理后在mRNA和蛋白水平上,脂合成和脂分解相關基因和蛋白表達量均上升,但脂質合成相關基因的mRNA和蛋白的表達水平上調幅度較高。為了進一步探究Loureirin B促進成脂的機制,我們首先確定了其可能通過GPR120來發(fā)揮作用,通過RT-PCR和Western blot結果發(fā)現(xiàn)處理組GPR120的mRNA水平和蛋白表達都顯著上升(P0.01),加入GPR120的抑制劑AH7614后,細胞內(nèi)的脂滴明顯減少,通過RT-PCR和Western blot得到的結果與表型一致;進一步研究發(fā)現(xiàn),胰島素信號通路的敏感性增強,促進了GLUT4的轉位,進而促進葡萄糖的吸收,最終促進細胞內(nèi)脂質的合成。綜上所述,80μmol/L的天然小分子龍血素B可顯著抑制脂肪細胞的增殖,在分化期可顯著促進細胞內(nèi)脂質的沉積,是一種潛在的促進動物體內(nèi)脂肪沉積、改善肉品質的候選天然小分子。
【學位單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S852.2
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號對照表
文獻綜述
    第一章 文章綜述
        1.1 脂質合成
            1.1.1 脂質合成的途徑
        1.2 脂肪細胞分化的分子機制
            1.2.1 脂肪合成相關轉錄因子
            1.2.2 脂肪細胞分化過程中的PI3K-Akt信號通路
            1.2.3 葡萄糖轉運蛋白4（GLUT4）
        1.3 天然小分子研究進展
            1.3.1 天然小分子
            1.3.2 天然小分子的靶標研究
            1.3.3 天然小分子龍血素B的研究進展
            1.3.4 天然產(chǎn)物及Loureirin B調控脂肪沉積研究現(xiàn)狀
試驗研究
    第二章 LOUREIRIN B對3T3-L1 脂肪細胞增殖的影響
        前言
        2.1 材料與方法
            2.1.1 細胞
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 試劑
            2.1.4 實驗方法
            2.1.5 數(shù)據(jù)處理
        2.2 結果
            2.2.1 Loureirin B處理3T3-L1脂肪細胞濃度的篩選
            2.2.2 Loureirin B對3T3-L1脂肪細胞增殖的影響
        2.3 討論
        2.4 小結
    第三章 LOUREIRIN B對3T3-L1脂肪細胞分化的調控作用
        前言
        3.1 材料與方法
            3.1.1 細胞
            3.1.2 主要儀器
            3.1.3 試劑
            3.1.4 實驗方法
            3.1.5 數(shù)據(jù)處理
        3.2 結果與分析
            3.2.1 Loureirin B對3T3-L1脂肪細胞分化的影響
            3.2.2 Loureirin B對3T3-L1脂肪細胞分化相關基因表達的影響
            3.2.3 Loureirin B對3T3-L1脂肪細胞分化相關蛋白表達的影響
        3.3 討論
        3.4 小結
    第四章 LOUREIRIN B對3T3-L1脂肪細胞分化調控的機制研究
        前言
        4.1 材料與方法
            4.1.1 細胞
            4.1.2 主要儀器
            4.1.3 試劑
            4.1.4 實驗方法
            4.1.5 數(shù)據(jù)處理
        4.2 結果與分析
            4.2.1 Loureirin B依賴于GPR120來調控3T3-L1脂肪細胞的分化
            4.2.2 Loureirin B促進3T3-L1脂肪細胞分化的通路研究
        4.3 討論
        4.4 小結
結論、創(chuàng)新點與下一步研究計劃
    結論
    創(chuàng)新點
    下一步研究計劃
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介

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本文編號：2887397