隨著我國乳業(yè)發(fā)展的不斷多樣化,奶牛乳腺炎的發(fā)生率居高不下。由于其病因復(fù)雜,臨床癥狀明顯,近年來隱性乳腺炎病例逐年增多,已逐漸成為一種難以治療的疾病。金黃色葡萄球菌是奶牛乳腺炎的致病病原微生物之一,易對抗生素產(chǎn)生耐藥性,臨床治療效果不明顯。細(xì)菌的分離鑒定是確定病原微生物應(yīng)用最廣的方法,分子分型方法近年來已廣泛應(yīng)用于病原菌流行病學(xué)研究,不同地區(qū)金黃色葡萄球菌的分子分型具有差異性。因此,可利用分子分型方法對金黃色葡萄球菌流行菌株的進(jìn)化方式和傳播途徑做進(jìn)一步的探究。本研究從吉林省部分地區(qū)患奶牛乳腺炎的乳樣中分離獲得金黃色葡萄球菌,并建立基于毛細(xì)管電泳的MLVA分子分型方法。共采集吉林省15個奶牛場患有奶牛乳腺炎且未經(jīng)藥物治療的乳樣300份,經(jīng)分離純化、革蘭氏染色鏡檢和OptiRead自動微生物鑒定系統(tǒng)分離出156株革蘭氏陽性菌,其中金黃色葡萄球菌18株,最后分型成功的為11株。同時對所有金黃色葡萄球菌選取13種抗生素進(jìn)行藥敏分析,分型成功的11株中顯示有2株全耐藥的菌株。11株菌對頭孢西丁、慶大霉素、青霉素、卡那霉素、克林霉素、氯霉素耐藥率為100%,其余抗生素耐藥率為:紅霉素(72.7%)、四環(huán)素(63.6%)、環(huán)丙沙星(63.6%)、甲氧氨芐嘧啶(45.4%)、利福平(36.3%)、萬古霉素(18.1%)、利奈唑烷(18.1%)。萬古霉素和利奈唑烷是對金黃色葡萄球菌敏感的抗生素,但也出現(xiàn)了部分耐藥現(xiàn)象。通過8個不同VNTR位點的多態(tài)性分析對其進(jìn)行MLVA分型研究。首先優(yōu)化PCR反應(yīng)條件,隨后對瓊脂糖凝膠電泳的退火溫度進(jìn)行8個反應(yīng)條件的優(yōu)化,取每個VNTR位點優(yōu)化效果最佳的PCR反應(yīng)產(chǎn)物通過毛細(xì)管電泳法進(jìn)行基因分型。參照金黃色葡萄球菌的MLVA分型數(shù)據(jù)庫,將同一菌株在8個VNTR位點上的重復(fù)單元次數(shù)按照順序進(jìn)行編碼,構(gòu)成MLVA簡介進(jìn)行分型。結(jié)果成功將11株金黃色葡萄球菌分為四種型別,分別命名為JLSau1、JLSau2、JLSau3、JLSau4。通過基因測序比對,其中JLSau1型與數(shù)據(jù)庫中MT3027型一致,其余3種均有相近型別。將分得四種型別與數(shù)據(jù)庫中的菌株型別進(jìn)行聚類分析,結(jié)果顯示四種基因型均具有相近性,JLSau1與JLSau4的相近度最高,JLSau2、JLSau3、JLSau4三者之間具有較高相近性。
【學(xué)位單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S858.23
【部分圖文】：

圖２芯片??Ｆｉｇ．２?ｃｈｉｐ??

１．１科瑪嘉顯色培養(yǎng)基上生長形態(tài)??金黃色葡萄球菌在科瑪嘉顯色培養(yǎng)基上呈現(xiàn)粉紅色生長，劃線初始濃度較高??細(xì)菌增長密集，如圖３所示，培養(yǎng)基顯示有單菌落的形態(tài)。菌落呈圓形，且有凸??起狀，邊緣較整齊。??圖３顯色培養(yǎng)基??Ｆｉｇ．３?Ｍｏｎｏｃｈｒｏｍａｔｉｃ?ｍｅｄｉｕｍ??１．２哥倫比亞血瓊脂平板上生長形態(tài)??如圖４所示，金黃色葡萄球菌在哥倫比亞血瓊脂平板上菌落呈白色，通過純??化培養(yǎng)，菌落生長不密集，純化后的單菌落較多，菌落周圍出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。如圖??５所示，挑取密集菌落通過肉眼觀察，可見金黃色。??＃?ＪＨ??圖４血瓊脂平板?圖５肉眼可見金黃色??Ｆｉｇ．４?Ｂｌｏｏｄ?ａｇａｒ?ｐｌａｔｅ?Ｆｉｇ．５?Ｇｏｌｄｅｎ?ｙｅｌｌｏｗ?ｖｉｓｉｂｌｅ?ｔｏ?ｔｈｅ?ｎａｋｅｄ?ｅｙｅ??１８??

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【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2876137