發(fā)布時(shí)間：2020-11-05 13:44

【摘要】：隱性乳房炎是奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)中的高發(fā)病,通常是由于致病菌經(jīng)奶牛乳頭侵入乳腺所導(dǎo)致的。目前,國(guó)內(nèi)外牧場(chǎng)主要采用在擠奶前以及擠奶后對(duì)奶牛乳頭進(jìn)行清洗劑清洗來(lái)預(yù)防以及治療奶牛隱性乳房炎。然而傳統(tǒng)使用的化學(xué)清洗劑因其具有藥物殘留的副作用,使其不適合在奶牛乳房炎防治中長(zhǎng)期使用,因此研究人員致力于開(kāi)發(fā)新的安全且有效的化學(xué)清洗劑替代物用以防治奶牛乳房炎。近幾年,乳酸菌在多種疾病的防治過(guò)程中都有較好的療效。因此,乳酸菌在奶牛隱性乳房炎的防治過(guò)程中是否有效值得深入探討。本研究以11頭患隱性乳房炎奶牛為研究對(duì)象,采用復(fù)合乳酸菌乳頭清洗劑(LAB,試驗(yàn)組)與化學(xué)清洗劑(CD,對(duì)照組)在擠奶前以及擠奶后對(duì)奶牛乳頭進(jìn)行清洗,清洗時(shí)間為0天、1天、10天和12天。清洗后試驗(yàn)組與對(duì)照組共采集奶牛乳頭中乳樣69份。采用體細(xì)胞數(shù)測(cè)定法、細(xì)菌總數(shù)測(cè)定法、熒光定量PCR技術(shù)、三代測(cè)序技術(shù)以及非靶向代謝組學(xué)技術(shù)對(duì)69份奶牛乳頭乳樣進(jìn)行檢測(cè),分析比較奶牛乳頭中體細(xì)胞數(shù)、細(xì)菌總數(shù)、乳房炎致病菌數(shù)、微生物菌群組成以及整體代謝物組成的變化情況。旨在從多方面綜合評(píng)價(jià)LAB對(duì)奶牛乳頭微生態(tài)系統(tǒng)的影響,進(jìn)而達(dá)到對(duì)奶牛隱性乳房炎的防治效果。結(jié)果表明,兩種乳頭清洗劑均能使奶牛乳頭乳樣中的體細(xì)胞數(shù)降低,并且LAB的降低效果更好。同時(shí),LAB組與CD組中的細(xì)菌總數(shù)與葡萄球菌數(shù)均明顯減少,而兩組中乳酸菌數(shù)明顯升高,且LAB組中乳酸菌的升高量明顯大于CD組。熒光定量PCR分析結(jié)果表明,使用復(fù)合乳酸菌乳頭清洗劑清洗10天后奶牛乳頭中三種乳房炎致病菌Escherichia coli、Staphylococcus aureus以及Streptococcus agalactiae的平均含量顯著降低,然而有益菌Lactobacillus的含量卻顯著升高。這說(shuō)明復(fù)合乳酸菌乳頭清洗劑不僅能夠在奶牛乳頭外形成一層保護(hù)屏障,防止外界微生物入侵。同時(shí),也能夠抑制奶牛乳頭中常見(jiàn)乳房炎致病菌的生長(zhǎng),有助于改善奶牛乳頭微生態(tài)環(huán)境,進(jìn)而對(duì)奶牛隱性乳房炎的發(fā)生起到預(yù)防作用�；赟ingle Molecule Real-Time的三代測(cè)序結(jié)果表明,奶牛乳頭細(xì)菌群落具有較高的微生物多樣性。并且,LAB與CD均能夠使奶牛乳頭中細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變。值得注意的是,LAB與CD兩種清洗劑均不能有效抑制奶牛乳頭中Bacillus cereus的生長(zhǎng),這就說(shuō)明未來(lái)需要篩選更多的具有抑制Bacillus cereus生長(zhǎng)的乳酸菌菌種用于新型復(fù)合乳酸菌乳頭清洗劑的開(kāi)發(fā)�；赨ltra Performance Liquid Chromatograph-Quadrupole Time of Flight-Mass Spectrometry的非靶向代謝組學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明,使用LAB與CD處理后奶牛乳頭牛乳中代謝物組成存在顯著差異。與CD組相比,LAB組乳樣中維生素B_2、蘋(píng)果酸以及吲哚丙烯酸等代謝物平均含量顯著增加,而Tyr-cys、L-棕櫚酰肉毒堿以及L-硬脂酰甘氨酸等代謝物則顯著減少。同時(shí),隨著清洗時(shí)間的增加,不同時(shí)間點(diǎn)奶牛乳頭乳樣中代謝物也會(huì)發(fā)生明顯改變。使用LAB處理10天后,乳樣中葡萄糖、乳糖以及花生四烯酸等代謝物含量增加,而硬脂酸、膽酸以及大部分短肽物質(zhì)則顯著減少。結(jié)果表明,LAB能夠通過(guò)調(diào)節(jié)乳頭內(nèi)代謝物組成進(jìn)而改善乳頭內(nèi)微生態(tài)環(huán)境,有助于增強(qiáng)乳房的防御功能。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S858.23
【圖文】：

圖 1 試驗(yàn)樣品采集流程圖Fig.1 The sampling flowchart of experiment表 1 樣品采集分組信息Table.1 Information of sample collectionNo. of cows Group Sample No. of cows Group Sample1 LAB-0d A1 1 CD-0d A132 (left teat) A2 2 (right teat) A143 A3 3 A154 A4 4 A166 A6 6 A187 A7 7 A198 A8 8 A209 A9 9 A2110 A10 10 A22

3 結(jié)果與分析3.1 牛乳中體細(xì)胞與細(xì)菌總數(shù)測(cè)定結(jié)果如圖 2 所示，在使用乳頭清洗劑清洗過(guò)程中，69 個(gè)乳樣中 SCC 變化范圍為 6.7萬(wàn)到 102 萬(wàn) cells/mL。Dervishi 等[17]研究報(bào)道當(dāng)奶牛 SCC 數(shù)大約 20 萬(wàn) cells/mL 時(shí)，該奶牛被認(rèn)為患有隱性乳房炎。本實(shí)驗(yàn)中選取 11 頭被診斷為患隱性乳房炎的奶牛為研究對(duì)象。經(jīng) CD 和 LAB 清洗奶牛乳頭后，兩組乳樣中的 SCC 均減少，并且與CD 組相比較，使用 LAB 清洗后牛乳中的 SCC 更低。然而，用無(wú)菌水替代兩種清洗劑清洗奶牛乳頭兩天后，牛乳中的 SCC 顯著上升，進(jìn)一步說(shuō)明 LAB 與 CD 兩種乳頭清洗劑均能夠降低奶牛乳頭牛乳中的 SCC。

清洗劑清洗后其平均含量均有所變化，但是其變化并不顯著。同時(shí)，使用 LAB 能夠使乳樣中的葡萄球菌數(shù)顯著降低，然而這種變化在 CD 組中卻并不顯著。從活菌計(jì)數(shù)結(jié)果可以初步判定，LAB 與 CD 均能夠有效抑制奶牛乳頭乳樣中致病菌的生長(zhǎng)，同時(shí)均能夠有效提高奶牛乳頭乳樣中的乳酸菌含量，并且 LAB 在提升乳樣中乳酸菌含量時(shí)其效果明顯優(yōu)于 CD。
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本文編號(hào)：2871715